精子蛋白17靶向腫瘤體內成像研究.pdf

1、學位論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：1 、堅持以“求實、創(chuàng)新”的科學精神從事研究工作。2 、本論文是我個人在導師指導下進行的研究工作和取得的研究成果。3 、本論文中除引文外，所有實驗、數(shù)據(jù)和有關材料均是真實的。4 、本論文中除引文和致謝的內容外，不包含其他人或其它機構已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。5 、其他同志對本研究所做的貢獻均已在論文中作了聲明并表示了謝意。研究生簽名： 銎垂紐日 期： 漁f 坌二皇= ≥l學位論文使用授權聲明本人完全了解

2、南京師范大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，學校有權保留學位論文并向國家主管部門或其指定機構送交論文的電子版和紙質版；有權將學位論文用于非贏利目的的少量復制并允許論文進入學校圖書館被查閱；有權將學位論文的內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索；有權將學位論文的標題和摘要匯編出版。保密的學位論文在解密后適用本規(guī)定。 ．～研究生簽名： 毯圭塹．日 期： 鎏＆二堇：蘭f疊■r飛曩，llI 曩h。▲r．I■k隅r●兩摘要摘 要l I I I I I I I

3、I I I I l l l I I I I l l l l 1 1 1、t17 2 6 0 2 7分子影像學是利用現(xiàn)有的成像技術早期發(fā)現(xiàn)疾病的分子變異，也可以利用特異探針無創(chuàng)性地檢測，從而在細胞與分子水平上評估被治療靶目標的效果。實現(xiàn)真正意義上的分子影像學技術的三大要素為分子探針、信號放大和高靈敏探測儀。分子影像學利用分子探針一插入人體細胞內一遇到特定基因產(chǎn)物或特定分子時一發(fā)射信號- - - P ET 、M R J 、C T 、光學成像

4、儀或紅外線記錄其信號一顯示圖像。精子蛋白1 7 ( s p e r m p r o t e i n1 7 ，S p l 7 ) 正常表達在人睪丸中的精母細胞、精子細胞以及成熟精子，在多發(fā)性骨髓瘤、卵巢癌等一些臨床惡性腫瘤細胞中異常表達，被候選為腫瘤免疫治療和分子診斷的新靶標。即使正常組織有少量表達，也沒有明確的生理功能，而在多種惡性腫瘤組織中異常大量表達，且很少釋放到血循環(huán)中，是腫瘤活體內顯像和生物治療的理想分子靶點，可以用來作為體內分

5、子影像學診斷和免疫靶向治療的分子靶標。在本研究第一部分，我們做T S p l 7 靶向腫瘤體內外磁共振成像的研究。首先，在偶聯(lián)劑E D C ／N H S 作用下，將殼聚糖及硅烷修飾的磁性氧化鐵納米顆粒與純化的抗S p1 7 單克隆抗體結合，制備抗S p l 7 抗體免疫磁性納米顆粒( i m m u n o m a g n e t i c n a n o p a rt i c l e s ，I M P s ) ，并用酶聯(lián)免疫吸附試驗(

6、E L I S A ) 檢測了磁納米探針的免疫活性，結果表明成功實現(xiàn)了抗體與磁性納米顆粒的偶聯(lián)，并且n 烈P s 保持良好的抗體活性。然后，我們通過免疫細胞化學及流式細胞技術檢測到肝癌細胞表面有S p l 7 異常表達，之后用肝癌細胞建立腫瘤動物模型，免疫組織化學證實成功建立表達S p l 7 蛋白的腫瘤動物模型；最后，將兩種S p l 7 抗體免疫磁性納米顆粒通過尾靜脈注入腫瘤裸鼠體內，通過磁共振成像及普魯士藍染色比較靶向效果，結果顯

7、示a n t i ．S p l 7 ．C S @ M N P s 探針在動物磁共振成像M R I 中的作用優(yōu)于a n t i ．S p l 7 ．S i l a n e @ M N P s 探針，具有更好的特異性。在本研究的第二部分，我們做Y S p l 7 靶向腫瘤體內近紅外成像研究。首先，在偶聯(lián)劑E D C ／N H S 作用下，用一種新型生物相容性近紅外熒光染料吲哚花菁綠( i n d o c y a ai n eg r e e

8、n , I C G ) 的衍生物I C G ．D e r - 0 2 與S p l 7 單克隆抗體偶聯(lián)，形成免疫近紅外熒光探針，并用分光光度儀測定了樣品的光譜性質及酶聯(lián)免疫吸附試驗( E L I S A ) 檢測了近紅外熒光探針的免疫活性，結果表明成功實現(xiàn)了抗體與I C G ．D e r - 0 2 近紅外染料的偶聯(lián)，并且保持良好的抗體活性；然后，我們成功建立表達S p l 7 蛋白的腫瘤動物模型；最后，將荷瘤小鼠分為2 組，分別經(jīng)尾靜