精子成熟相關(guān)蛋白的研究.pdf

1、對(duì)于男性生殖或者受精而言，正常的精子是必要的條件。伴隨附睪內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)的過(guò)程，哺乳動(dòng)物的精子會(huì)發(fā)生形態(tài)學(xué)、生化以及生理等方面的改變，特別是運(yùn)動(dòng)能力的獲得，因?yàn)闊o(wú)論是在女性生殖道內(nèi)朝向卵細(xì)胞的長(zhǎng)途跋涉，還是后續(xù)的穿卵過(guò)程，都必須依賴(lài)精子的運(yùn)動(dòng)能力。 在我們的前期研究中，曾首次發(fā)現(xiàn)鋅a2糖蛋白（ZAG）和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29（ERp29）前體都與精子的成熟相關(guān)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：人精漿中的ZAG可與a1抗胰蛋白酶相結(jié)合，進(jìn)而激活附睪頭部不能運(yùn)動(dòng)的精

2、子向前運(yùn)動(dòng)。其次，通過(guò)高分辨率的二維電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)SD大鼠精子上存在ERp29前體蛋白，并證實(shí)該蛋白含量隨著精子在附睪內(nèi)的成熟過(guò)程而逐漸增加。 然而，人精子上是否含有ZAG，ZAG影響精子運(yùn)動(dòng)的機(jī)制如何；另外，對(duì)于ERp29前體而言，附睪精子上的是否屬于膜蛋白，而這種蛋白是否與附睪上皮的分泌相關(guān)，由此可見(jiàn)，這些問(wèn)題目前還都尚待探究。 基于上述的問(wèn)題，在本課題研究中，我們克隆表達(dá)了人類(lèi)ZAG，并制備出相應(yīng)的多克隆

3、抗體。然后運(yùn)用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀檢測(cè)等技術(shù)在人精子上首次將ZAG蛋白得到了驗(yàn)證并進(jìn)行定位。此外，我們還發(fā)現(xiàn)該多克隆抗體能夠顯著抑制正常精液中上游精子的運(yùn)動(dòng)，并能同時(shí)降低精子胞內(nèi)cAMP和PKA水平。其次，SD大鼠附睪精子的ERp29前體蛋白被證實(shí)為精子膜蛋白，并且尾部精子的含量都比頭部的顯著增高。與此同時(shí)，免疫組化結(jié)果也顯示在附睪上皮組織中ERp29前體蛋白的表達(dá)量同樣是尾部高于頭部。 本研究課題對(duì)于ZAG和ERp29