ICAM-1、VCAM-1的表達在實驗性重癥急性胰腺炎肺損傷中的作用及意義.pdf

1、目的：觀察細胞間粘附分子—1（intercellular adhesion molecule—1，ICAM—1）血管細胞粘附分子—1（vascular cell adhesion molecule—1，VCAM—1）在重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）大鼠胰、肺組織內(nèi)的表達情況，并觀察二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）對急性胰腺炎肺損傷（pa

2、ncreatitis associated lung injury，PALI）的保護作用。 方法：成年健康SD大鼠96只，雌雄不限，體重250～300 g，隨機分為對照組、SAP組、PDTC預處理組，每組再分為3h、6h、9h及12h四個時間組（n＝8）。采用5%?；悄懰徕c（sodium taurocholate，Tc—Na）（0．1ml/100 g）胰膽管逆行注射誘發(fā)大鼠SAP模型。大鼠術(shù)前12 h禁食不禁水，1%戊巴比妥鈉腹

3、腔注射麻醉（0．3 ml/100 g），常規(guī)消毒，上腹部正中切口2 cm入腹。加工鈍頭的4#頭皮針于十二指腸乳頭附近穿刺十二指腸降部外側(cè)壁，自十二指腸乳頭逆行刺入胰膽管末端約1cm，分別在近肝門處及十二指腸乳頭附近用無損傷性小動脈夾夾閉胰膽管兩端，注入5%Tc—Na（注射速度0．1 ml/min），注完后5min拔除針頭，放開動脈夾，逐層關(guān)腹，背部皮下注射生理鹽水約4ml以補充術(shù)中丟失水分。PDTC預處理組在建立SAP模型前1h腹腔內(nèi)注

4、射NF—κB的特異性抑制劑PDTC（100mg/kg）。對照組處理同SAP組，但胰膽管內(nèi)注射等量生理鹽水。各模型組一次穿刺未成功及術(shù)中死亡者淘汰。開腹觀察胰腺大體變化及腹水情況，開胸觀察肺大體變化及胸水情況，經(jīng)心臟抽血約3～5ml，提取血清，并用4℃的4%的多聚甲醛行灌注內(nèi)固定，最后分別取胰腺和肺組織，再用4%多聚甲浸入固定24 h，石蠟包埋、切片。對照組、SAP組、PDTC預處理組大鼠放血致死后分別取左肺下葉稱濕重，置60℃烤箱連續(xù)烘

5、烤24 h，去除水分，分別稱干重，計算肺濕/干比值。全自動血生化分析儀檢測血清淀粉酶并采用ELISA法測定血清sICAM—1、sVCAM—1濃度。肉眼觀察胰、肺組織出血、水腫等變化；HE染色，光鏡觀察胰、肺組織病理學改變；并采用免疫組化SP法觀察ICAM—1、VCAM—1在胰、肺織內(nèi)的表達情況并計數(shù)陽性細胞數(shù)。 結(jié)果： 1．血清淀粉酶濃度測定：SAP各組均明顯高于對照組（P<0．01），12h達高峰；PDTC預處理各組明

6、顯低于SAP組（P<0．05）但明顯高于對照組（P<0．05）。 2．血清sICAM—1、sVCAM—1濃度的測定：SAP各組均明顯高于對照組（P<0．01），12h達高峰；PDTC預處理各組明顯低于SAP組（P<0．05）但明顯高于對照組（P<0．05）。 3．胰、肺肉眼觀察：對照組大鼠胰腺無明顯變化；SAP各組均可見胰腺充血、水腫，局部有散在出血點，局灶性壞死及血性腹水，腸系膜、大網(wǎng)膜上可見皂化斑；PDTC預處理組腹

7、水和皂化斑明顯減少。對照組大鼠肺肉眼觀察無明顯變化；SAP組均可見肺水腫，表面散在出血點，有少量胸水，局部有小片狀紫褐色肺不張區(qū)，且隨病程進展上述表現(xiàn)加重；PDTC預處理組肺水腫、胸腔積液均明顯減輕。 4．肺濕/干比值檢測：SAP各組隨病程進展，肺濕/干比值逐漸增加，至12 h比值達最高。 5．胰、肺組織光鏡觀察：對照組胰腺組織病理改變不明顯。SAP各組胰腺間質(zhì)均可見炎性細胞浸潤和紅細胞滲出，且隨病情進展程度加重。3h組

8、見胰腺間質(zhì)有少量炎性細胞浸潤，腺泡細胞少量壞死；6h組胰腺間質(zhì)大量紅細胞滲出和炎性細胞浸潤，腺泡細胞廣泛重度腫脹壞死；9h組胰腺間質(zhì)紅細胞滲出和炎性細胞浸潤增多，腺泡細胞腫脹壞死擴大；12h組壞死范圍進一步擴大，可達整個小葉，但小葉輪廓尚見。PDTC預處理組光鏡下表現(xiàn)與SAP組相似，但炎細胞浸潤和紅細胞滲出減輕。光鏡下對照組肺組織無明顯病理改變。SAP各組肺組織均可見肺間質(zhì)水腫，間質(zhì)內(nèi)紅細胞滲出和炎性細胞浸潤，上述改變隨病程進展?jié)u加重。

9、此外6h、9h、12 h組還可見局灶性或小片狀肺不張（表現(xiàn)為肺泡壁破裂，塌陷實變）。PDTC預處理組光鏡下表現(xiàn)與SAP組相似，但上述改變較SAP組減輕。 6．ICAM—1，VCAM—1在胰、肺組織內(nèi)的表達：對照組肺組織中未見表達ICAM—1，VCAM—1，SAP組與PDTC預處理組的中性粒細胞、單核/巨噬細胞、支氣管粘膜上皮細胞、肺泡上皮細胞及部分血管內(nèi)皮細胞的胞膜或胞漿內(nèi)明顯表達ICAM—1。而VCAM—1則表達于單核/巨噬細

10、胞、支氣管粘膜上皮細胞、肺泡上皮細胞及部分血管內(nèi)皮細胞的胞膜或胞漿內(nèi)。SAP3h組ICAM—1、VCAM—1陽性信號增強，陽性細胞數(shù)分別為3．09±0．05、2．20±0．08。隨時程進展，ICAM—1、VCAM—1陽性細胞增多，強度增加，到12 h達高峰，其陽性細胞數(shù)分別為7．09±0．55、6．14±0．05。PDTC預處理組各時間點ICAM—1、VCAM—1表達與SAP組相比均明顯減弱，陽性細胞數(shù)減少（P<0．05），但仍明顯高于

11、對照組（P<0．05）。對照組胰腺組織內(nèi)無ICAM—1、VCAM—1陽性細胞，在SAP組與PDTC預處理組胰腺組織內(nèi)ICAM—1主要表達于浸潤的中性粒細胞及胰腺腺泡細胞的胞膜和胞漿中，VCAM—1主要表達于浸潤的單核/巨噬細胞及胰腺腺泡細胞的胞膜和胞漿中，其在胰腺組織中的表達規(guī)律同肺組織。 結(jié)論： 1．ICAM—1，VCAM—1在對照組大鼠胰肺組織內(nèi)不表達或低水平表達，而在SAP組大鼠胰肺組織內(nèi)明顯表達，且隨病程進展陽性

12、細胞數(shù)逐漸增多，表達強度增強。3h，6h，9h逐漸增加，12 h陽性細胞數(shù)達高峰。提示ICAM—1，VCAM—1的活化參與了大鼠SAP并發(fā)肺損傷的發(fā)生發(fā)展過程并呈動態(tài)變化。 2．對照組肺微血管內(nèi)皮細胞中未發(fā)現(xiàn)ICAM—1、VCAM—1表達，而在SAP各組肺微血管內(nèi)皮細胞中可見ICAM—1、VCAM—1表達，提示ICAM—1、VCAM—1的激活可能是誘發(fā)肺微血管內(nèi)皮細胞損傷而導致肺循環(huán)障礙進而加重肺損傷的重要因素之一。 3