Visfatin與2型糖尿病和肥胖的關(guān)聯(lián)分析及其對脂肪細胞分化作用的初步研究.pdf

1、內(nèi)臟脂肪素(visfatin)是新發(fā)現(xiàn)的一種內(nèi)臟脂肪組織高表達的蛋白,具有類似胰島素功能,并能與胰島素受體結(jié)合,使胰島素受體發(fā)生磷酸化,從而激活胰島素信號通路中的下游信號分子.因此,visfatin可能參與2型糖尿病(T2DM)和肥胖癥的發(fā)生過程.為了進一步明確visfatin與T2DM及肥胖癥間的聯(lián)系,我們檢測了241例包括正常對照、葡萄糖調(diào)節(jié)受損(IGR)和T2DM患者血清中visfatin的水平;分析了14例包括正常對照、肥胖及肥

2、胖合并Tr2DM患者的人體腹部脂肪組織visfatin基因mRNA的水平;采用470例正常對照和470例T2DM患者,進行visfatin基因5個SNP位點多態(tài)性與T2DM、肥胖及其相關(guān)指標的遺傳關(guān)聯(lián)分析;同時,對發(fā)現(xiàn)顯著關(guān)聯(lián)結(jié)果的SNP位點通過雙螢光素酶報告基因系統(tǒng)進行功能的初步研究. 本研究發(fā)現(xiàn)：1)血清visfatin水平在T2DM、IGR和正常糖耐量個體間無顯著差異.肥胖個體visfatin水平顯著小于正常體重個體(13

3、.66±0.87ng/ml vs.15.46±0.47ng/ml,P=-0.03).在男性中,提示visfatin水平與BMI呈負相關(guān)(r=0.17 P=0.07),與wHR呈正相關(guān)(r=0.16 P=0.08),統(tǒng)計均為邊緣顯著. 2)肥胖組及肥胖合并T2DM的人體腹部脂肪組織的 visfatin mRNA 水平高于正常體重對照組,但差異無統(tǒng)計顯著性. 3)-1535C/T、rs10953502和rs2058539三S

4、NP位點與血清 visfatin 水平均不關(guān)聯(lián).-1535C/T和 rs4730155位點基因型與 T2DM 相關(guān)聯(lián),-1535C/T位點和 rs4730155位點為CC純合子的個體患 T2DM 的風險高于其它基因型個體,其OR值分別為1.37和1.38.在校正血脂指標后,該風險因素變得不再顯著.五個SNP位點的兩個常見單體型 TCAAT (P=0.003)及CCAAT (P=0.002)與 T2DM 顯著關(guān)聯(lián).另外本研究發(fā)現(xiàn)-1535

5、C/T與血清甘油三酯,rs52058539與總膽固醇和高密度脂蛋白,rs711438與總膽固醇和低密度脂蛋白相關(guān)聯(lián)(P<0.05). 4)連接visfatin基因上游包含-1535C/T位點純合子CC和TT片段的螢火蟲熒光素酶報告基因的表達結(jié)果顯示TT純合子的表達量比CC純合子升高24﹪,表達差異具統(tǒng)計顯著性(P=0.001).此結(jié)果提示visfatin基因可能是與T2D 及血脂水平相關(guān)聯(lián)的一個有效候選基因.Visfatin 基

6、因上游的SNP位點變異可能影響該基因的表達. 近十多年來,人們對脂肪組織的認識發(fā)生了革命性的改變,脂肪組織不僅僅是一個惰性的儲存能量的器官,同時它也是一個活躍的內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌器官.脂肪細胞分泌的因子如adiponectin和IGF-1能通過自分泌的作用促進脂肪細胞的自身分化.在3T3-L1由前脂肪細胞分化成脂肪細胞的進程中,visfatin蛋白表達的逐步增多提示其可能作為一個功能蛋白參與脂肪細胞的分化.我們利用3T3-L

7、1 細胞株作為脂肪細胞體外分化的模型,通過重組蛋白干預和RNA干擾(RNAi)的方法檢測visfatin對脂肪細胞分化的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn)低劑量的visfatin能輕微促進脂肪細胞的分化,而RNAi能部分抑制脂肪細胞的成熟和脂滴的形成,并使與成熟脂肪細胞相關(guān)的一些蛋白表達發(fā)生改變.在3T3-L1細胞生長抑制階段降低visfatin的表達,能使誘導分化細胞的C/EBP α、PPAR-γ、LPL、aP2和adiponectin的mRNA.表達量