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1、目的:通過(guò)慢性間歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠模型,來(lái)探討哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信號(hào)通路變化對(duì)大鼠胰島β細(xì)胞數(shù)量的影響。
方法:18只成年雄性SD大鼠隨機(jī)均分為常氧組(A組)、CIH組(B組)、藥物CIH組(C組)。實(shí)驗(yàn)中通過(guò)低氧艙制造CIH模型,低氧條件(60S/空氣,60S/N2,交替充入,艙內(nèi)氧氣濃度
2、保持在5%-21%之間),BC組給予CIH處理,A組在常壓、空氣環(huán)境培養(yǎng)艙中飼養(yǎng);C組給予腹腔注射雷帕霉素0.2mg/kg/day,A、B組給予同等體積的DMSO和PBS混合液。每天造模時(shí)間為8:30~16:30,5周后通過(guò)免疫熒光法檢測(cè)胰島mTOR及通路相關(guān)蛋白指標(biāo)eIF4E、p-S6的表達(dá),并通過(guò)Image-Pro Plus軟件計(jì)算每個(gè)胰島胰島素陽(yáng)性區(qū)域的面積及胰島β細(xì)胞數(shù)量;用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清胰島素含量。對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行
3、正態(tài)性和方差齊性的檢驗(yàn),根據(jù)結(jié)果選擇使用非參數(shù)檢驗(yàn),使用SPSS18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行秩變換,采用K個(gè)獨(dú)立樣本的Kruskal-Wallis檢驗(yàn),并根據(jù)結(jié)果進(jìn)行兩個(gè)樣本間的Mann-Whitney U檢驗(yàn)。
結(jié)果:與A組相比,B組mTOR、p-S6的表達(dá)、每個(gè)胰島內(nèi)胰島素陽(yáng)性區(qū)域的面積以及胰島β細(xì)胞的個(gè)數(shù)增多(P≤0.01),血清胰島素含量也增多(P≤0.05)。而C組p-S6的表達(dá)和每個(gè)胰島內(nèi)β細(xì)胞的個(gè)數(shù)減少(P≤0.01),每
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