KiSs-1-GPR54系統(tǒng)在小鼠子宮內(nèi)膜基質細胞蛻膜化中的作用及其機制.pdf

1、目的:
　　探討KISS-1/GPR54系統(tǒng)在子宮內(nèi)膜的表達、定位及其在蛻膜化中作用。
　　方法:
　　1、通過實時定量PCR、免疫組織化學等方法觀察小鼠圍植入期子宮內(nèi)膜組織中KISS-1和GPR54的表達水平及表達部位變化。
　　2、運用在體人工蛻膜化模型，觀察KISS-1、GPR54的表達是否受活化胚胎的影響。
　　3、構建去卵巢及性甾體激素處理的子宮模型，觀察甾體激素對KISS-1和GPR54表達的影

2、響。
　　4、通過子宮內(nèi)膜基質細胞分離、培養(yǎng)及體外誘導分化，檢測在離休狀態(tài)下蛻膜化過程中KISS-1、GPR54表達水平的變化。
　　5、通過RNA干擾技術，觀察KISS-1對小鼠子宮內(nèi)膜基質細胞蛻膜化的影響。
　　結果:
　　1、實時定量PCR結果顯示，在妊娠D1-D5天，KISS-1、GPR54 mRNA表達量均較低。隨著蛻膜化的進程（妊娠D6-D8天），與妊娠D1天相比，KiSS-1和GPR54 mRNA的

3、表達量均顯著性增加(P＜0.01)。免疫組化結果顯示，在小鼠妊娠D1-4天，KiSS-1和GPR54蛋白主要定位于腔上皮和腺上皮細胞上，且表達水平較低，與實時定量PCR結果相一致。從妊娠D5天開始，KiSS-1和GPR54蛋白的表達量均顯著性增加，主要表達于圍繞胚胎的子宮蛻膜組織。
　　2、在在體的人工誘導蛻膜化模型中，與對照組相比，注射芝麻油一側的子宮角隨著時間的延長（假孕D5至8天）逐漸增大，而對照組子宮角沒有明顯變化。在人工

4、誘導蛻膜化的子宮組織，KiSS-1、GPR54 mRNA表達水平均隨著蛻膜的進展逐漸增加，至假孕第8天達到最高峰。在假孕第5天，KiSS-1、GPR54蛋白主要表達于腔上皮，且信號較弱，然而在假孕第6天，蛻膜組織中KISS-1、GPR54蛋白信號均顯著性增加，并隨著蛻膜化的進程逐漸增加。
　　3、在去卵巢的子宮組織中，KISS-1 mRNA表達水平比較低。經(jīng)E2、P4或E2+P4處理后，與對照組相比（芝麻油處理組），KISS-1

5、mRNA表達水平均顯著增加(均為P＜0.01)，并于注射后的3h達到高峰;P4與其拮抗劑RU486共同處理組沒有明顯增大(P＞0.05);E2與其拮抗劑Tam共同處理組，則進一步增強E2對KISS-1 mRNA表達上調(diào)的效應(P＜0.05)。
　　4、分離培養(yǎng)的小鼠子宮內(nèi)膜基質細胞，免疫熒光法檢測顯示，基質細胞表達Vimentin而不表達Cytokeratin。在體外經(jīng)E2和P4聯(lián)合處理24-72h后，基質細胞表現(xiàn)出的形態(tài)符合蛻膜

6、細胞的特異性形態(tài)學特征;免疫印跡法和定量PCR檢測顯示，蛻膜化的標記分子，包括Cyclin D3蛋白、PR蛋白以及dPRP mRNA的表達水平在體外培養(yǎng)48h、72h后均顯著性增加。同時KISS-1和GPR54 mRNA的表達水平也隨時間逐漸增加。
　　5、在體外培養(yǎng)的子宮基質細胞蛻膜化模型中，轉染KISS-1 siRNA后，與對照組相比（無義序列組），在培養(yǎng)后24h、48h、72h，KISS-1 mRNA表達水平均顯著性下降(P

7、＜0.01，0.05)，說明KISS-1 siRNA能特異性抑制了KiSS-1mRNA的表達。KISS-1基因下調(diào)同時，蛻膜化的標記分子dPRP(mRNA)、Cyclin D3（蛋白）和PR（蛋白）的表達水平也均相應下調(diào)，提示KISS-1基因的下調(diào)能抑制子宮基質細胞蛻膜化進程。
　　結論:
　　在妊娠早期，KiSS-1/GPR54系統(tǒng)時空性的表達于母胎界面，且受E2、P4及子宮內(nèi)膜蛻膜化的影響;干涉KISS-1后子宮內(nèi)膜基質