hBMP-,2-基因轉染牙齦成纖維細胞對牙周組織再生影響的實驗研究.pdf

1、該研究利用基因轉染技術,將hBMP<,2>基因轉染牙齦成纖維細胞,賦予其成骨細胞特性,探討其在牙周組織再生中的作用,為將其作為理想的種子細胞應用于牙周組織工程提供實驗依據(jù).為此,該研究進行了如下幾方面的實驗:①將含有pBK-hBMP<,2>噬菌粒表達載體的大腸桿菌擴增后,以堿裂解法提取pBK-hBMP<,2>,并進行提純和酶切鑒定.為以下實驗做好準備.②利用脂質體將hBMP<,2>基因轉染至人牙齦成纖維細胞中,經(jīng)G418篩選后獲得了穩(wěn)定

2、表達hBMP<,2>基因的細胞克隆;在體外培養(yǎng)擴增后,通過原位雜交、免疫組化、夾心ELISA以及轉染細胞培養(yǎng)上清液對MC3T3—E1細胞堿性磷酸酶活性和骨鈣素合成的影響等檢測,從mRNA及蛋白水平證實了穩(wěn)定轉染hBMP<,2>基因的人牙齦成纖維細胞能夠表達具有一定生物學活性的hBMP<,2>.轉染細胞可持續(xù)表達有活性的hBMP<,2>蛋白達10代以上.③在上述實驗的基礎上,對穩(wěn)定表達hBMP<,2>的人牙齦成纖維細胞從形態(tài)、增殖特性和細

3、胞周期、堿性磷酸酶活性和骨鈣素合成以及體外形成礦化結節(jié)的能力等方面,對其生物學特性進行了觀察.④將hBMP<,2>基因轉染的人牙齦成纖維細胞與藻酸鈣凝膠復合后,進行體外培養(yǎng).利用HE染色技術、免疫組化方法和掃描電鏡觀察細胞在藻酸鈣凝膠中的生物學行為.⑤將hBMP<,2>基因轉染后的自體牙齦成纖維細胞作為種子細胞,與藻酸鈣凝膠復合,植入狗的人工牙周組織缺損區(qū).通過組織學觀察和組織學測量,評價基因轉染牙齦成纖維細胞對牙周組織再生的影響,并以