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文檔簡介
1、目的:卵泡顆粒細胞所提供的營養(yǎng)和信號是決定卵子能否正常生長和成熟的關(guān)鍵。人類卵泡顆粒細胞上存在著線粒體解耦聯(lián)蛋白2(UCP2)的表達。但UCP2在顆粒細胞中的具體作用尚末被充分闡釋。UCP2在顆粒細胞生長、增殖過程中到底發(fā)揮了何種作用?是否參與了卵母細胞生存環(huán)境的調(diào)節(jié)?本研究以原代培養(yǎng)的人類卵巢顆粒細胞為研究對象,通過引入UCP2特異性抑制劑京尼平,分析UCP2抑制對顆粒細胞氧化水平和抗氧化能力、線粒體膜電位強度、及培養(yǎng)液中甾體激素水平
2、的影響,探討UCP2在顆粒細胞中的作用,以及對和卵母細胞成熟、卵子發(fā)育的可能影響,從而為改善當(dāng)前輔助生殖技術(shù)周期妊娠結(jié)局提供新思路。
方法:以2011年10月~2012年10月在本生殖中心行常規(guī)IVF或ICSI的輸卵管因素不孕者卵丘卵母的顆粒細胞進行原代培養(yǎng),加入UCP2蛋白抑制劑京尼平,用實時熒光定量PCR(FQ-PCR)和Western blot檢測和驗證顆粒細胞UCP2mRNA和UCP2蛋白水平,并通過分析顆粒細胞的
3、ROS水平、谷胱甘肽水平,線粒體膜電位水平,超氧化物歧化酶水平,以及培養(yǎng)液中E2、P激素水平的變化,以分析UCP2功能抑制對顆粒細胞的影響。
結(jié)果:
1、隨著京尼平濃度增加,顆粒細胞活力呈下降趨勢,在100μM時明顯低于對照組。
2、京尼平呈濃度依賴性抑制UCP2蛋白表達,在20μM和50μM時明顯低于對照組;京尼平濃度20μM時,隨著作用時間的延長,蛋白水平表達呈下降趨勢,在24h和48h明顯
4、低于對照組;而mRNA水平并未隨著京尼平濃度的改變而發(fā)生明顯改變。
3、顆粒細胞過氧化損傷隨京尼平濃度增加而增加,表現(xiàn)為細胞ROS水平呈上升趨勢,在50μM時明顯高于對照組;總谷胱甘肽和GSH含量呈下降趨勢但無顯著性差異,而GSH/GSSG比值呈下降趨勢并在50μM時明顯低于對照組;MnSOD活力呈增高趨勢,在50μM時明顯高于對照組。
4、隨著京尼平濃度增加,UCP2蛋白表達下降,線粒體膜電位呈降低趨勢,在
5、20μM和50μM時明顯低于對照組。
5、隨著京尼平濃度增加,顆粒細胞甾體激素雌二醇、孕酮分泌呈下降趨勢,孕酮水平在50μM時明顯低于對照組。
結(jié)論:
1、顆粒細胞UCP2表達和ROS生成呈負相關(guān),即UCP2控制顆粒細胞過氧化水平,保護細胞抵抗氧化損傷,抗氧化反應(yīng)增強。
2、顆粒細胞UCP2表達影響線粒體相關(guān)功能,UCP2低表達時線粒體膜電位降低,UCP2的過低表達時預(yù)示細胞趨向早
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