解耦聯(lián)蛋白2對(duì)顆粒細(xì)胞抗氧化能力及線粒體功能的影響研究.pdf

1、目的:卵泡顆粒細(xì)胞所提供的營(yíng)養(yǎng)和信號(hào)是決定卵子能否正常生長(zhǎng)和成熟的關(guān)鍵。人類卵泡顆粒細(xì)胞上存在著線粒體解耦聯(lián)蛋白2(UCP2)的表達(dá)。但UCP2在顆粒細(xì)胞中的具體作用尚末被充分闡釋。UCP2在顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖過程中到底發(fā)揮了何種作用？是否參與了卵母細(xì)胞生存環(huán)境的調(diào)節(jié)？本研究以原代培養(yǎng)的人類卵巢顆粒細(xì)胞為研究對(duì)象，通過引入U(xiǎn)CP2特異性抑制劑京尼平，分析UCP2抑制對(duì)顆粒細(xì)胞氧化水平和抗氧化能力、線粒體膜電位強(qiáng)度、及培養(yǎng)液中甾體激素水平

2、的影響，探討UCP2在顆粒細(xì)胞中的作用，以及對(duì)和卵母細(xì)胞成熟、卵子發(fā)育的可能影響，從而為改善當(dāng)前輔助生殖技術(shù)周期妊娠結(jié)局提供新思路。
　　 方法:以2011年10月～2012年10月在本生殖中心行常規(guī)IVF或ICSI的輸卵管因素不孕者卵丘卵母的顆粒細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，加入U(xiǎn)CP2蛋白抑制劑京尼平，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(FQ-PCR)和Western blot檢測(cè)和驗(yàn)證顆粒細(xì)胞UCP2mRNA和UCP2蛋白水平，并通過分析顆粒細(xì)胞的

3、ROS水平、谷胱甘肽水平，線粒體膜電位水平，超氧化物歧化酶水平，以及培養(yǎng)液中E2、P激素水平的變化，以分析UCP2功能抑制對(duì)顆粒細(xì)胞的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、隨著京尼平濃度增加，顆粒細(xì)胞活力呈下降趨勢(shì)，在100μM時(shí)明顯低于對(duì)照組。
　　 2、京尼平呈濃度依賴性抑制UCP2蛋白表達(dá)，在20μM和50μM時(shí)明顯低于對(duì)照組;京尼平濃度20μM時(shí)，隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，蛋白水平表達(dá)呈下降趨勢(shì)，在24h和48h明顯

4、低于對(duì)照組;而mRNA水平并未隨著京尼平濃度的改變而發(fā)生明顯改變。
　　 3、顆粒細(xì)胞過氧化損傷隨京尼平濃度增加而增加，表現(xiàn)為細(xì)胞ROS水平呈上升趨勢(shì)，在50μM時(shí)明顯高于對(duì)照組;總谷胱甘肽和GSH含量呈下降趨勢(shì)但無顯著性差異，而GSH/GSSG比值呈下降趨勢(shì)并在50μM時(shí)明顯低于對(duì)照組;MnSOD活力呈增高趨勢(shì)，在50μM時(shí)明顯高于對(duì)照組。
　　 4、隨著京尼平濃度增加，UCP2蛋白表達(dá)下降，線粒體膜電位呈降低趨勢(shì)，在

5、20μM和50μM時(shí)明顯低于對(duì)照組。
　　 5、隨著京尼平濃度增加，顆粒細(xì)胞甾體激素雌二醇、孕酮分泌呈下降趨勢(shì)，孕酮水平在50μM時(shí)明顯低于對(duì)照組。
　　 結(jié)論:
　　 1、顆粒細(xì)胞UCP2表達(dá)和ROS生成呈負(fù)相關(guān)，即UCP2控制顆粒細(xì)胞過氧化水平，保護(hù)細(xì)胞抵抗氧化損傷，抗氧化反應(yīng)增強(qiáng)。
　　 2、顆粒細(xì)胞UCP2表達(dá)影響線粒體相關(guān)功能，UCP2低表達(dá)時(shí)線粒體膜電位降低，UCP2的過低表達(dá)時(shí)預(yù)示細(xì)胞趨向早