褪黑激素(MEL)在鵝顆粒細(xì)胞中的抗氧化作用研究.pdf

1、褪黑激素(melatonin，MEL)是一種生物體內(nèi)強(qiáng)有效的天然抗氧化劑，不僅自身可以清除自由基，而且還可以增強(qiáng)體內(nèi)抗氧化酶的作用，減輕活性氧對(duì)機(jī)體的損害。目前對(duì)于MEL抗氧化功能的研究多集中于哺乳動(dòng)物的卵母細(xì)胞，而對(duì)于同樣在卵泡發(fā)育過程中起著重要作用的顆粒細(xì)胞研究較少，尤其在鳥類上這方面相關(guān)的報(bào)道還未曾見到。本研究以天府肉鵝母系母鵝為試驗(yàn)材料，研究了鵝卵泡卵黃內(nèi)MEL的含量和不同等級(jí)卵泡顆粒層細(xì)胞中抗氧化酶(SOD1、GPx1、CAT

2、)的表達(dá)量，探討MEL在卵泡發(fā)育過程中的抗氧化作用。同時(shí)以鵝的顆粒細(xì)胞為模型，初步探討了MEL在鵝顆粒細(xì)胞中的抗氧化作用，再用H2O2模擬氧化應(yīng)激對(duì)顆粒細(xì)胞造成損傷，最后對(duì)H2O2誘導(dǎo)的顆粒細(xì)胞進(jìn)行MEL預(yù)處理，進(jìn)一步研究MEL可以緩解H2O2對(duì)顆粒細(xì)胞造成的凋亡，從而驗(yàn)證MEL在鵝顆粒細(xì)胞中的抗氧化作用。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)測了鵝等級(jí)卵泡卵黃中MEL的含量，發(fā)現(xiàn)隨著卵泡的發(fā)育成熟，MEL的含量呈現(xiàn)遞增的趨勢，在F1卵泡

3、內(nèi)達(dá)到最大值8.865 pg/ml，等級(jí)卵泡內(nèi)的MEL均高于血漿(5.811 pg/ml)，表明MEL在卵泡的發(fā)育過程中起著重要作用。
　　(2)檢測了鵝等級(jí)卵泡顆粒細(xì)胞中抗氧化酶SOD1、GPx1、CAT的基因表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)三種酶的表達(dá)并不呈明顯的發(fā)育性趨勢，SOD1、GPx1在F2內(nèi)表達(dá)較高（P＜0.05），分別達(dá)到23.5倍和10.4倍。而CAT在4-6mm、8-10mm、F4內(nèi)表達(dá)較高(P＜0.05)。
　　(3)以鵝

4、顆粒細(xì)胞為模型，用不同濃度(0、0.1、1、10 ng/ml)外源MEL作用于顆粒細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)MEL可以提高細(xì)胞的活性（P＜0.05），減少細(xì)胞內(nèi)ROS含量，促進(jìn)MEL受體(P＜0.05)，抗氧化酶SOD1、GPx1、CAT（P＜0.05）和抗凋亡基因BCL-2的表達(dá)(P＞0.05)，抑制促凋亡基因CASPASE3的表達(dá)(P＜0.05)，初步說明MEL對(duì)顆粒細(xì)胞起著抗氧化作用，抑制細(xì)胞凋亡。
　　(4)用不同濃度(0、10、100、

5、1000 umol/L) H2O2模擬氧化應(yīng)激作用于顆粒細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)H2O2(1000 umol/L)顯著降低了顆粒細(xì)胞的活性(P＜0.05)，抑制SOD1的基因（P＜0.05）和蛋白表達(dá)（P＞0.05），促進(jìn)GPx、CAT、 MEL受體的基因和蛋白表達(dá)（P＜0.05），抑制BCL-2而促進(jìn)CASPASE3的基因表達(dá)（P＜0.05），表明H2O2能夠促進(jìn)顆粒細(xì)胞的凋亡。
　　(5)用H2O2和MEL共同作用于顆粒細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)MEL能夠