2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文大腸桿菌血腦屏障侵襲基因ibeB的功能分析姓名:趙偉東申請學(xué)位級別:博士專業(yè):細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師:陳譽(yù)華20040301進(jìn)入真核細(xì)胞并發(fā)揮作用。最近,本實(shí)驗(yàn)室觀察到一個新的現(xiàn)象:將ibeB基因轉(zhuǎn)染至鼠胚胎干細(xì)胞后可以引起類神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)變化,以及觸發(fā)神經(jīng)干細(xì)胞前體細(xì)胞的標(biāo)志性蛋白——Nestin的表達(dá)?;诖?,本研究采I鉬gsN轉(zhuǎn)染的方法,利用真核表達(dá)載體,對ibeB基因在人宮頸癌上皮細(xì)艟(Hela)中的高表達(dá)所

2、產(chǎn)生的影響進(jìn)行了研究。通過對Hela細(xì)胞進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染以觀察ibeB基因?qū)ela細(xì)胞生物學(xué)特性的影響并對IbeB蛋白發(fā)揮作用的分子機(jī)制進(jìn)行了探討。方法l真核表達(dá)載體的構(gòu)建11提取pcDNA3/7C(含有ibeB基因)和Invitrogen公司載體pcDNA3I/HisC質(zhì)粒DNA,將ibeB基因全長(17kb)定向克隆至pcDNA31/HisC,命名為pcHis—ibeB12雙酶切驗(yàn)證克隆是否成功,將pcHis—ibeB送交測序,驗(yàn)證i

3、beB基圍讀碼框的正確性13利用QiagenMidirep質(zhì)粒DNA中量提取試劑盒,分別提取pcD—NA3】/HisC和pcHis—ibeB質(zhì)粒DNA2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞21利用Fugene”’6transfeetionreagent,對Hela細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,通過lO一】4天的G418篩選,挑取單克隆,擴(kuò)大培養(yǎng),形成能夠穩(wěn)定傳代的細(xì)胞克隆株2:2利用His—tag的抗體,用Westernblot方法檢測His6一IbeB融合蛋白的表達(dá)

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