γ-干擾素抑制腎癌細(xì)胞株786-0增殖及可能機(jī)制.pdf

1、第一部分、人腎癌組織中MAD1及hepaCAM的表達(dá)及相關(guān)性分析
　　目的:探究人腎癌組織中肝細(xì)胞粘附分子hepaCAM(Hepatocytecell adhesion molecule)和MAD1(Mitotic arrest deficiency-1)蛋白表達(dá)情況及兩者之間相關(guān)性和各組臨床病理參數(shù)的分析。
　　方法:采用石蠟包埋37例腎癌組織及37例相應(yīng)癌旁組織，免疫組織化學(xué)法(Immunohistochemistry)

2、檢測(cè)該組織中hepaCAM蛋白及MAD1蛋白的表達(dá)及其在細(xì)胞中表達(dá)的定位。
　　結(jié)果:免疫組化分析結(jié)果顯示37腎癌組織均不表達(dá)hepaCAM及MAD1，37例腎癌癌旁組織有不同程度hepaCAM和MAD1表達(dá)。hepaCAM在37例癌旁組織中細(xì)胞膜及細(xì)胞漿都有表達(dá)，主要表達(dá)于細(xì)胞膜，未見細(xì)胞核有表達(dá)。MAD1在細(xì)胞膜和細(xì)胞胞漿表達(dá)的癌旁組織有33例且主要在細(xì)胞胞漿表達(dá)，細(xì)胞膜、細(xì)胞漿和細(xì)胞核均表達(dá)的腎癌癌旁組織4例。圖片經(jīng)Imag

3、e pro-plus6.0分析，結(jié)果顯示:在腎癌組織中hepaCAM及MAD1均表達(dá)缺失，正常表達(dá)于癌旁組織(hepaCAM，P＜0.01;MAD1，P＜0.01)。hepaCAM與MAD1在腎癌中的表達(dá)缺失與各臨床參數(shù)間均無相關(guān)性(P＞0.05)。Person相關(guān)性分析結(jié)果表明在腎癌中hepaCAM蛋白表達(dá)缺失與MAD1蛋白缺失表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.881，P＜0.01)。
　　結(jié)論:腎癌組織中hepaCAM蛋白表達(dá)的缺失及MA

4、D1蛋白表達(dá)的缺失呈正相關(guān)，為探討二者在腎癌發(fā)生發(fā)展及治療中的提供了臨床依據(jù)。
　　第二部分、γ-干擾素抑制腎癌細(xì)胞株786-0增殖的機(jī)制研究
　　目的:研究γ-干擾素對(duì)腎癌細(xì)胞株786-0增殖的影響及可能的分子機(jī)制的研究。
　　方法:應(yīng)用五組梯度終濃度(1000U/mL，2000U/mL，3000U/mL，4000U/mL，5000U/mL) IFN-γ處理人腎癌786-0細(xì)胞，于三個(gè)時(shí)間點(diǎn)(24 h，48 h，72

5、 h)用CCK-8（cell Counting Kit-8）法檢測(cè)腎癌786-0細(xì)胞增殖抑制率。以終濃度900U/mLIFN-γ作用腎癌786-0細(xì)胞48h作為實(shí)驗(yàn)組，未用IFN-γ處理的786-0細(xì)胞作為對(duì)照組，流式細(xì)胞儀檢測(cè)(flow cytometry, FCM)腎癌786-0細(xì)胞周期變化。RT-PCR檢測(cè)肝細(xì)胞粘附分子hepaCAM基因表達(dá);Western blotting檢測(cè)hepaCAM和MAD1蛋白的表達(dá)水平。將攜帶hep

6、aCAM基因的重組質(zhì)粒用腺病毒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染腎癌786-0細(xì)胞，Western blotting檢測(cè)hepaCAM及MAD1蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:γ-干擾素抑制腎癌786-0細(xì)胞增殖呈時(shí)間劑量依賴性(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示細(xì)胞G0/G1期比例增高(n=3，P＜0.01)，RT-PCR結(jié)果提示hepaCAM基因表達(dá)水平升高(n=3，P＜0.05)，未見其在蛋白水平變化(data not show