shRNA沉默PLCε基因?qū)δI癌786-0細胞增殖的影響.pdf

1、第一部分 shRNA沉默PLCε基因?qū)δI癌786-0細胞增殖的抑制作用 目的：探討經(jīng)短發(fā)夾RNA(short hairpin RNA，shRNA)干擾技術(shù)沉默磷脂酶Cε(phosphol ipase C epsilon，PLCε)基因表達后對腎癌786-O細胞增殖的抑制作用。 方法：經(jīng)脂質(zhì)體介導重組質(zhì)粒(pGenesil-PLCε)和空質(zhì)粒(pGenesil-NP)轉(zhuǎn)染786-O細胞后，通過RT-PCR檢測PLCε mR

2、NA的表達；MTT法檢測轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后對細胞增殖的抑制率；流式細胞術(shù)分析轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后細胞周期的變化。 結(jié)果：轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后可明顯抑制PLCεmRNA的表達，其抑制率為69.7％；轉(zhuǎn)染24h、48h和72h后細胞增殖抑制率分別為21.2％，31.6％和32.7％；流式細胞術(shù)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后細胞周期的分布發(fā)生了改變，G0/G1期細胞增多，S期和G2/M期細胞減少，細胞阻滯于G0/G1期，并出現(xiàn)了亞二倍體“凋亡峰”。

3、結(jié)論：經(jīng)RNA干擾技術(shù)阻斷PLCε基因表達后可明顯抑制腎癌786-O細胞增殖，并使細胞周期分布發(fā)生改變，細胞增殖減緩，提示PLCε可作為腎癌基因治療的分子靶點，為針對PLCε基因進行腫瘤生物治療研究奠定了理論基礎(chǔ)。 第二部分 shRNA沉默PLCε基因抑制腎癌細胞增殖作用的機制 目的：探討經(jīng)shRNA沉默PLCε基因表達抑制腎癌細胞增殖的作用機制。 方法：采用RT-PCR和免疫細胞化學法分析轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后P27和