版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndrome,MDS)是一組起源于多能造血干/祖細胞的異質(zhì)性惡性血液疾病,以高風險向急性白血病轉(zhuǎn)化為其特征,故又俗稱白血病前期(Preleukemia,PL)。目前本病的發(fā)病機制尚未闡明,缺乏有效的治療手段。因此,探索MDS的分子發(fā)病機制,尋找MDS的有效治療手段具有重要意義。MDS最常見的染色體缺失是5號染色體長臂的缺失,所有伴有del(5q)的MDS患者染色體缺失區(qū)域均含
2、有5q31-5q32區(qū)帶,稱為共缺失區(qū)域(common delete region,CDR)。對CDR的基因測序研究未發(fā)現(xiàn)顯性突變,均表現(xiàn)為基因表達量的下降。其中,位于該區(qū)域的RPS14基因,是單倍劑量減少的抑癌基因,近年研究表明,伴有del(5q)的MDS患者體內(nèi)RPS14基因表達水平下降。而對于5號染色體表型正常的MDS患者體內(nèi)RPS14基因表達變化是否也具有同樣的意義目前尚未有研究報道。因此,研究RPS14在MDS發(fā)生發(fā)展中的作用
3、具有重要意義。本實驗通過構(gòu)建RPS14基因RNAi慢病毒載體(Lentiviral Vector,LV),觀察該基因在人MDS細胞株SKM-1細胞中的表達,并將構(gòu)建成功的重組慢病毒載體RPS14-shRNA轉(zhuǎn)染人MDS細胞株SKM-1細胞,使目的基因在靶細胞內(nèi)表達沉默。以便深入研究RPS14基因?qū)DS細胞內(nèi)生物學行為的影響。通過細胞增殖率變化等方法觀察RPS14基因表達沉默后對SKM-1細胞增殖的影響。
方法:
1
4、、RPS14基因RNAi慢病毒載體RPS14-shRNA的構(gòu)建及鑒定:選用新型慢病毒載體pGC-SIL-GFP,首先設(shè)計合成RPS14互補脫氧核糖核酸(Complementary deoxynucleic acid,cDNA)的PCR產(chǎn)物與線性化慢病毒載體相連接,產(chǎn)物經(jīng)測序鑒定確認,與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細胞,產(chǎn)生重組慢病毒載體RPS14-shRNA,逐孔稀釋法測定病毒滴度;采用流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染效率,Western blot檢測轉(zhuǎn)染
5、前后目的細胞內(nèi)RPS14蛋白的表達變化。
2、重組慢病毒載體RPS14-shRNA轉(zhuǎn)染SKM-1細胞后對其增殖影響的研究:將重組慢病毒載體RPS14-shRNA轉(zhuǎn)染SKM-1細胞(轉(zhuǎn)染組),同時設(shè)立未轉(zhuǎn)染組(SKM-1)、空載體轉(zhuǎn)染組,應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(MTT)法測定各組細胞的光密度值(Optical density,OD)。
結(jié)果:
1、本實驗成功構(gòu)建了重組慢病毒載體RPS14-shRNA,滴度達2.0
6、×102TU/ml,構(gòu)建的慢病毒載體能夠高效率的轉(zhuǎn)染SKM-1細胞,100感染復數(shù)(Multiplicity of infection,MOI)的重組慢病毒載體對SKM-1細胞的轉(zhuǎn)染效率約為58.26%,Western blot檢測顯示轉(zhuǎn)染后靶細胞RPS14蛋白的表達水平明顯低于轉(zhuǎn)染前,實驗組與對照組比較具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
2、重組慢病毒載體RPS14-shRNA轉(zhuǎn)染SKM-1細胞后抑制其增殖:轉(zhuǎn)染48h、72h
7、、96h,收集各組細胞,MTT法檢測各組細胞的OD值,轉(zhuǎn)染重組慢病毒載體后對SKM-1細胞的生長有抑制作用,與空載體轉(zhuǎn)染組相比具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
結(jié)論:
1、慢病毒載體可以高效率的轉(zhuǎn)染血液腫瘤細胞,對血液腫瘤的分子治療具有重要的臨床應(yīng)用價值。
2、對于5號染色體表型正常的MDS細胞株SKM-1細胞RPS14基因表達沉默可抑制其增值。
3、本研究結(jié)果表明RPS14基因在MDS的發(fā)生發(fā)展
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- RPS14基因過表達對人MDS細胞株MUTZ-8增殖的影響.pdf
- 地西他濱聯(lián)合曲古抑菌素A對SKM-1 MDS細胞株的體外研究.pdf
- siRNA沉默SLC7A5基因?qū)KM-1細胞系生物學特性的影響.pdf
- siRNA沉默TUBB2C基因?qū)KM-1細胞系生物學特性的影響.pdf
- shrna沉默人肝癌細胞株skhep1kir6.2基因的研究
- shRNA沉默PLCε基因?qū)δI癌786-0細胞增殖的影響.pdf
- 建立人骨髓增生異常綜合征細胞株SKM-1荷瘤小鼠模型.pdf
- ShRNA介導的AFP基因沉默對肝癌細胞增殖的影響.pdf
- 丁酸鈉對骨髓增生異常綜合征細胞株SKM-1誘導分化及其機制的研究.pdf
- 鐵負荷狀態(tài)對骨髓增生異常綜合征轉(zhuǎn)白細胞株SKM-1甲基化狀態(tài)的影響.pdf
- 沉默Twist基因?qū)CT116細胞株體外增殖及侵襲性影響的研究.pdf
- shRNA沉默RYBP基因?qū)L-60細胞增殖與凋亡的影響.pdf
- RNAi靶向沉默AFP對人HepG2細胞株細胞增殖及周期相關(guān)基因表達的影響.pdf
- RNA干擾沉默LSD1基因?qū)μ准毎馨土鯦eko-1細胞株增殖、凋亡的研究.pdf
- shRNA-FHIT對胃癌細胞株BGC-823增殖和凋亡的影響.pdf
- 地西他濱聯(lián)合三氧化二砷在SKM-1細胞株中的協(xié)同作用研究.pdf
- 沉默F(xiàn)AK基因表達對人肝癌細胞株HCC-LM3增殖、遷移、凋亡的影響.pdf
- RNA干擾技術(shù)沉默iNOS基因?qū)m頸癌細胞株增殖活性及VEGF表達的影響.pdf
- 轉(zhuǎn)錄因子Foxo3a在地西他濱誘導MDS細胞株SKM-1向單核細胞分化、凋亡、周期阻滯及自噬中的作用研究.pdf
- RNAi致DKK-1基因沉默的骨髓瘤細胞株對鼠胚胎成骨細胞分化的影響.pdf
評論
0/150
提交評論