建立人骨髓增生異常綜合征細(xì)胞株SKM-1荷瘤小鼠模型.pdf

1、目的：探討使用MDS細(xì)胞株SKM-1來建立MDS荷瘤小鼠模型。
　　 方法：我們常規(guī)培養(yǎng)MDS細(xì)胞株SKM-1細(xì)胞；取對數(shù)生長期的SKM-1細(xì)胞，以1×108/ml的細(xì)胞濃度進(jìn)行接種。裸鼠（BALB/CA-nu/nu）分為3批，均為4周齡左右。第一批共10只裸鼠，每只接種0.1ml、約1.0×107個細(xì)胞于右肩胛皮下。第二批共15只裸鼠，接種細(xì)胞數(shù)量為每只0.2ml、約2.0×107個細(xì)胞于右肩胛皮下，每只裸鼠在注射細(xì)胞前24小

2、時內(nèi)接受400cGy的直線加速器全身照射，劑量率200cGy/min。無菌環(huán)境中解剖成瘤小鼠，取出皮下腫瘤，勻漿后培養(yǎng)。第三批裸鼠共15只。取對數(shù)生長期的腫瘤細(xì)胞，以1.0×108/ml的細(xì)胞濃度，每只接種0.2ml于4周齡左右的裸鼠右肩胛皮下，每只裸鼠仍然于注射細(xì)胞前24小時內(nèi)接受400cGy的直線加速器全身照射。
　　 結(jié)果：第一批裸鼠成瘤率為0（0/10），第二批裸鼠成瘤率約為13.3％左右（2/15），第三批裸鼠成瘤率約

3、為53.3％左右（8/15）。皮下腫瘤成瘤率第三組明顯高于第一組（P=0.005），也高于第二組（P=0.020）為了獲得生物學(xué)性能穩(wěn)定的動物模型，我們分析鑒定了荷瘤組織的來源及其生物學(xué)特性，結(jié)果：
　　 （1）組織病理學(xué)：HE染色顯微鏡下可見腫瘤中央有壞死組織，周圍有炎性細(xì)胞浸潤瘤細(xì)胞排列雜亂，不規(guī)則，核深染，核漿比例大，高倍鏡下可見瘤細(xì)胞排列雜亂無章，核深染，核漿比大，可見核分裂相。
　　 （2）流式細(xì)胞術(shù)免疫學(xué)：荷

4、瘤細(xì)胞表面免疫表型CD3、CD5、CD7、CD14均<1％，CD13：38.41％，HLA-DR：45.06％，與接種的人MDS細(xì)胞株SKM-1特性相符合。
　　 （3）荷瘤細(xì)胞染色體檢測顯示：分析荷瘤組織染色體發(fā)現(xiàn)與MDS細(xì)胞株SKM-1細(xì)胞染色體特性相符合，表現(xiàn)為多倍體、超三倍體多見，涉及多個染色體的缺失異常如del（1q）、del（1p）、del（2p）、del（4p）、del（5q）、del（6q），涉及9號染色體的異常

5、der(9)add(q34)del(p21)，涉及15號染色體異常如add（15p）等等，還有+1、+2、+3、+4、+5、+7、-8、+9、+10、+11、+13、-14、+15、+16、+17、+18、+21、+22等等染色體異常。而裸鼠染色體（2n=40）均為端著絲粒染色體，易與荷瘤細(xì)胞染色體區(qū)分。
　　 （4）免疫組織化學(xué)檢測顯示：腫瘤組織強(qiáng)表達(dá)突變型P53蛋白。經(jīng)上述病理組織學(xué)、流式細(xì)胞免疫學(xué)，免疫組織化學(xué)，細(xì)胞遺傳學(xué)