丙戊酸鈉協(xié)同阿霉素抑制骨髓增生異常綜合征細(xì)胞株MUTZ-1增殖并誘導(dǎo)其凋亡的研究.pdf

1、目的：研究丙戊酸鈉(Sodium Valproate,SVPA)協(xié)同阿霉素(adriamycin,ADM)對(duì)人骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome,MDS)細(xì)胞株MUTZ-1細(xì)胞的抑制增殖和誘導(dǎo)凋亡作用,探討丙戊酸鈉協(xié)同阿霉素作用的可能機(jī)制,并可為臨床MDS的治療提供一定的理論依據(jù)。 方法： (1)采用四甲基偶氮唑藍(lán)(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)比色法檢

2、測(cè)0.25mmol/l SVPA和不同濃度ADM聯(lián)合對(duì)MUTZ-1細(xì)胞生長的抑制作用; (2)Wright-Giemsa染色后采用光學(xué)顯微鏡觀察小劑量SVPA和ADM聯(lián)合作用后細(xì)胞形態(tài)的變化； (3)流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)檢測(cè)不同濃度藥物作用后細(xì)胞凋亡率的變化； (4)用caspase-3酶標(biāo)儀法檢測(cè)單藥和聯(lián)合后caspase-3的活性變化。 (5)通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(re

3、verse transcription-polymerase chain reaction RT-PCR)技術(shù)分別檢測(cè)藥物作用后TOPOIImRNA水平表達(dá)量的改變。 結(jié)果： (1)單用0.25mmol/LSVPA時(shí)對(duì)細(xì)胞生長無影響(p>0.05),不同濃度的ADM(0.039μg/ml、0.078μg/ml、0.156μg/ml、0.312μg/ml和0.4μg/ml)與0.25mmol/L SVPA聯(lián)合用于MUTZ-

4、1細(xì)胞72h后,細(xì)胞抑制率分別為23.46±1.12％、49.87±0.84％和52.37±1.05％、78.43±4.34％、82.47±1.04％,明顯高于單用ADM時(shí)的5.08±0.79％、12.32±2.39％、23.65±1.34％、43.33±2.38％和47.85±1.46％(p<0.05)。其中以0.078μg/mL濃度ADM為最佳抑制濃度。 (2)0.25mmol/LSVPA聯(lián)合0.078μg/ml ADM作用

5、細(xì)胞株72h后,細(xì)胞呈現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。 (3)FCM檢測(cè)結(jié)果顯示0.25mmol/LSVPA和0.078μg/ml,0.156μg/ml ADM聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡率比單獨(dú)使用ADM組明顯增加,與對(duì)照組相比有顯著性差異(p<0.05)。 (4)Caspase-3檢測(cè)顯示兩藥聯(lián)合后Caspase-3明顯高于單藥水平。 (5)RT-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)0.25mmol/L SVPA聯(lián)合0.078μg/mlADM