凋亡蛋白抑制因子在骨髓增生異常綜合征患者及其細(xì)胞株MUTZ-1細(xì)胞中的作用及意義.pdf

1、[目的]:骨髓增生異常綜合征(MDS)是一組以血細(xì)胞質(zhì)、量異常和高風(fēng)險(xiǎn)發(fā)展成為急性白血病為特征的惡性克隆性造血干細(xì)胞病.病人常常表現(xiàn)為髓內(nèi)異常增生,但外周血細(xì)胞減少.這種現(xiàn)象近來被歸結(jié)于造血細(xì)胞的過度凋亡,而MDS向白血病的進(jìn)展則可能是由于獲得性的基因變異抑制細(xì)胞凋亡,從而使惡性克隆細(xì)胞得以存活.因此,凋亡目前已成為研究MDS發(fā)病機(jī)制的熱點(diǎn),與凋亡有關(guān)的基因也引起人們的廣泛關(guān)注.[方法]:1應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)及透射電鏡研究HHT誘導(dǎo)人骨

2、髓增生異常綜合征細(xì)胞株MUTZ-1,人急性紅白血病細(xì)胞K562,人淋巴瘤細(xì)胞株Jurkat,人骨髓瘤細(xì)胞株RMPI及人急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL60細(xì)胞凋亡及形態(tài),MUTZ-1細(xì)胞周期的變化.2半定量逆轉(zhuǎn)錄酶-多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)MDS患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞、上述細(xì)胞株及HHT作用MUTZ-1細(xì)胞后凋亡蛋白抑制因子survivin、XIAP及凋亡調(diào)節(jié)基因Bcl-2、Bax的表達(dá).3應(yīng)用反義轉(zhuǎn)染技術(shù)研究高三尖杉酯堿(HHT)和survivin反

3、義寡聚脫氧核苷酸(AS-ODN)對(duì)MUTZ-1細(xì)胞的作用及其機(jī)制.[小結(jié)]:1HHT能誘導(dǎo)MUTZ-1、K562、Jurkat、RPMI、HL60凋亡,相同濃度HHT作用12h后各細(xì)胞株凋亡率不同,其中K562凋亡率最低,Jurka與HL60凋亡率最高;不同濃度HHT作用6、12、24h后,MUTZ-1細(xì)胞凋亡呈時(shí)間和濃度依賴.2各細(xì)胞株均有不同水平survivin mRNA的表達(dá),其表達(dá)水平不同,其中K562表達(dá)最高,Jurkat與H

4、L60表達(dá)最低.細(xì)胞株survivin mRNA的表達(dá)水平與HHT誘導(dǎo)的凋亡率呈負(fù)相關(guān)(r=0.980,p=0.003).3HHT作用MUTZ-1細(xì)胞后,抗凋亡基因survivin mRNA下調(diào),而促凋亡基因Bax mRNA和抗凋亡基因XIAP Bcl-2mRNA表達(dá)無明顯改變.4HHT或Survivin AS-ODN作用MUTZ-1細(xì)胞后,細(xì)胞G1期明顯減少,而S期及G2期增多,細(xì)胞被阻滯在G2期.5Survivin AS-ODN能誘

5、導(dǎo)MUTZ-1細(xì)胞凋亡,下調(diào)抗凋亡基因survivin mRNA表達(dá),并可明顯提高M(jìn)UTZ-1細(xì)胞對(duì)HHT的敏感性.6Survivin mRNA在MDS患者中陽性率明顯高于正常對(duì)照(P<0.01),而且survivin mRNA在MDS各階段的陽性率也不同,隨著MDS的進(jìn)展,survivin mRNA的表達(dá)率也隨之增高,表明在MDS的進(jìn)展過程中survivin起重要作用.MDS患者及正常對(duì)照均表達(dá)XIAP、Bcl-2及Bax,但表達(dá)水平