電刺激對慢性低O2高CO2大鼠骨骼肌AMPK糖代謝通路的影響.pdf

1、目的：
　　利用慢性低氧高二氧化碳大鼠模型，模擬人體慢性阻塞性肺疾病(Chronicobstructive pulmonary disease，COPD)的病理生理特點，觀察該模型骨骼肌中糖代謝相關(guān)酶及相關(guān)蛋白的表達變化，探討電刺激對慢性低氧高二氧化碳大鼠骨骼肌AMPK/p38/GLUT-4糖代謝通路的可能影響。
　　方法：
　　本實驗利用慢性低氧高二氧化碳的動物模型，將成年SPF級雄性SD大鼠24只按照隨機數(shù)字表隨機

2、分成3組:正常對照組(NC)、低氧高二氧化碳組(HH)、低氧高二氧化碳+電刺激組(HE)，每組8只。除正常對照組外，其余兩組大鼠置于低氧高二氧化碳造模艙中（艙內(nèi)O2濃度維持在9.0％～11.0％，CO2濃度維持在5.0％～6.0％），每天8h，每周7天，共4周，其余時間與正常對照組處于同一室內(nèi)(室溫20～24℃，相對濕度50％～70％)，對照組生活在正常大氣環(huán)境中，飼養(yǎng)條件3組相同。每天造模后HE組大鼠給予腓腸肌電刺激，HH組及NC組予

3、以捆綁假刺激。造模結(jié)束后大鼠空腹尾靜脈取血，后麻醉固定，取腓腸肌組織分裝保存。(1)血糖值測定;(2)分光光度法，檢測大鼠骨骼肌組織LD含量，PFK、CS及LDH的活性;(3)熒光染色，半定量大鼠骨骼肌細胞膜上GLUT-4的表達;(4)蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot，WB)檢測AMPK、P-AMPK、p38、P-p38、GLUT-4蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　(1)各組大鼠空腹血糖值變化
　　與NC組相比

4、，HH組血糖明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;HE組與HH組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　(2)腓腸肌組織LD含量，PFK、CS及LDH的活性
　　HH組大鼠腓腸肌LD含量與NC組相比稍升高（P＞0.05），差異無統(tǒng)計學(xué)意義;HE組與HH組相比LD含量亦無明顯差別（P＞0.05）;CS與LDH活性HH組相比NC組有明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01），HE組與HH組相比活性升高，差異有

5、統(tǒng)計學(xué)意義;PFK活性HH組與NC組及HH組與HE組大鼠相比均無明顯差別，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　(3)腓腸肌組織肌纖維膜上GLUT-4的表達
　　免疫熒光結(jié)果顯示，與NC組相比，HH組大鼠骨骼肌肌纖維排列明顯紊亂，GLUT-4在肌纖維膜上的表達有明顯減低;與HH組相比，HE組骨骼肌形態(tài)結(jié)構(gòu)較規(guī)則，GLUT-4在肌纖維膜上的的表達明顯升高。
　　(4)腓腸肌組織中AMPK、P-AMPK、p38、P-p3

6、8、GLUT-4蛋白的表達
　　HH組大鼠與NC組相比骨骼肌中P-AMPK、P-p38、GLUT-4蛋白的表達均明顯降低，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;HE組與HH組相比上述蛋白表達明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）;三組大鼠骨骼肌中AMPK、p38表達無明顯差別，數(shù)值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　(1)慢性低O2高CO2可引起大鼠骨骼肌糖代謝向酵解方向轉(zhuǎn)變;
　　(2)