整合素β1、蛋白激酶C與膠質(zhì)瘤細(xì)胞骨架及侵襲性的實驗研究.pdf

1、目的 研究整合素(integrin)β1、蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)與細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)改變的關(guān)系及其對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響。 方法 以U251膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(U251MG)細(xì)胞為研究模型，通過細(xì)胞粘附實驗、遷移實驗和體外侵襲實驗，檢測整合素β1及PKC對人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞粘附、遷移和侵襲能力的影響；通過免疫熒光化學(xué)染色結(jié)合激光共聚焦顯微鏡和掃描電鏡方法，觀察細(xì)胞微絲和膠質(zhì)纖維酸性蛋

2、白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)等骨架蛋白數(shù)量、分布和細(xì)胞表面?zhèn)巫闱闆r，比較整合素β1、PKC對微絲、GFAP等骨架蛋白的影響。 結(jié)果 (1)PKC激活劑PMA增加U251MG細(xì)胞在FN上的粘附能力(P<0.05)，但PKC抑制劑Calphostin C及抗整合素β1抗體對細(xì)胞粘附能力無明顯影響。(2)PKC激活劑PMA增加U251MG細(xì)胞在FN的運動、遷移能力(P<0.01

3、)，PKC抑制劑Calphostin C及抗整合素β1抗體減弱U251MG細(xì)胞在FN上的運動、遷移能力(P<0.01)。(3)U251MG細(xì)胞內(nèi)可見散在的微絲結(jié)構(gòu)，在PKC激活劑PMA處理的細(xì)胞內(nèi)，難以見到清晰的細(xì)胞微絲骨架，并常見大量絮團狀的F-ac- tin小體，但PMA對GFAP的表達(dá)和結(jié)構(gòu)并無影響。PKC抑制劑Calphostin C使微絲沿細(xì)胞膜成簇狀排列，而抗整合素β1抗體可使細(xì)胞內(nèi)F-actin微絲形成束狀纖維(應(yīng)力纖維)

4、，粗壯而密集，且GFAP表達(dá)增強。(4)掃描電鏡觀察顯示，加人PMA后，U251細(xì)胞表面的偽足數(shù)量明顯增加，而PKC抑制劑Calphostin C及抗整合素β1抗體處理的細(xì)胞內(nèi)，偽足數(shù)量明顯減少，甚至消失。(5)PMA可促進(jìn)U251MG細(xì)胞的體外侵襲能力(P<0.01)，Calphostin C及抗整合素β1抗體可減弱此作用(P<0.01)。 結(jié)論 (1)整合素β1與FN協(xié)同作用，可通過激活PKC信號通路，改變U251M