蛋白激酶B(Akt)抑制劑哌立福新抗人惡性膠質(zhì)瘤細胞的作用及機制研究.pdf

1、目的：惡性膠質(zhì)母細胞瘤是最為常見的腦部惡性腫瘤，也是膠質(zhì)瘤當中惡性程度最高（WHO分級Ⅳ級）的一種。目前，盡管手術(shù)切除輔以術(shù)后積極的放化療已經(jīng)成為惡性膠質(zhì)母細胞瘤的標準治療方案，然而患者在確診之后，平均生存期仍僅有14個月。因此，尋找切之有效的抗惡性膠質(zhì)瘤的靶向藥物是目前惡性膠質(zhì)瘤研究迫切需要解決的問題。本課題我們研究蛋白激酶B抑制劑哌立福新（perfosine，PRF）對惡性膠質(zhì)瘤U251、U87MG細胞增殖、Akt/mTOR、AMP

2、K及其生長因子受體(PDGFR、EGFR)信號通路關(guān)鍵蛋白表達水平的影響及可能的機制。
　　方法：⑴取對數(shù)生長期細胞，以不同濃度的哌立福新作用人惡性膠質(zhì)瘤細胞后，用MTT法，集落形成實驗，臺盼藍染色和流式細胞術(shù)檢測哌立福新對惡性膠質(zhì)瘤細胞增殖的作用。⑵Western blot、免疫熒光檢測哌立福新作用于惡性膠質(zhì)瘤細胞后Akt/mTOR、AMPK信號通路中總的和磷酸化的Akt、S6、4EBP1、LKB1、AMPKα、ACC的改變，同

3、時檢測生長因子受體（EGFR、PDGFRα、PDGFRβ）的表達。⑶RT-PCR檢測生長因子受體相關(guān)基因EGFR、PDGFRα、PDGFRβ的表達。
　　結(jié)果：①哌立福新能有效抑制惡性膠質(zhì)瘤U87MG、U251細胞的體外增殖并呈濃度、時間依賴性，且在有效濃度范圍內(nèi)對正常小鼠星形膠質(zhì)細胞無明顯的抑制作用。②流式細胞檢測技術(shù)檢測結(jié)果顯示哌立福新能夠誘導(dǎo)人惡性膠質(zhì)瘤細胞周期阻滯在G2/M期，而在較高濃度時，哌立福新可以促進凋亡，且呈濃度

4、依賴性。③Western Blot及細胞免疫熒光結(jié)果顯示，哌立福新抑制惡性膠質(zhì)瘤細胞中Akt/mTOR信號通路，同時活化AMPK并使生長因子受體EGFR、PDGFRα、PDGFRβ表達下調(diào)，而PCR結(jié)果則表明哌立福新并不能從基因水平上影響惡性膠質(zhì)瘤細胞中受體PDGFR的表達。
　　結(jié)論：哌立福新抑制惡性膠質(zhì)瘤細胞的增殖、誘導(dǎo)周期阻滯且在較高濃度下促進凋亡。此外，哌立福新通過調(diào)節(jié)Akt/mTOR、AMPK信號通路，下調(diào)生長因子受體的