PHLPP對(duì)Akt表達(dá)影響及抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長的研究.pdf

1、目的：研究體外轉(zhuǎn)染PHLPP對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中Akt表達(dá)的影響，及PHLPP對(duì)腦膠質(zhì)細(xì)胞遷移、侵襲和增殖的影響并探討其作用機(jī)制。
　　方法：1.連接有PHLPP1、PHLPP2編碼基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞，空載轉(zhuǎn)染作對(duì)照，Western-blot檢測外源性的PHLPP1、PHLPP2的蛋白表達(dá)情況;
　　2.連接有PHLPP1、PHLPP2編碼基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染U251細(xì)胞，空載轉(zhuǎn)染作對(duì)照，Western-blot檢測過表達(dá)PH

2、LPP1、PHLPP2質(zhì)粒48h后Akt活性的變化以及PKC蛋白表達(dá)量的變化;
　　3.通過劃痕實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)PHLPP1、PHLPP2質(zhì)粒24h、48h后U251、U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移能力的變化;
　　4.通過Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)PHLPP1、PHLPP2質(zhì)粒48h后U251、U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲能力的變化;
　　5.通過CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測U251、U87細(xì)胞過表達(dá)PHLPP1、PHLPP2質(zhì)粒后隨著

3、時(shí)間增加增殖能力的變化;
　　6.轉(zhuǎn)染PHLPP1、PHLPP2質(zhì)粒48h后提取總蛋白，Western-blot檢測在Akt活性受到抑制的條件下，N-cadherin、β-catenin、Bcl-2蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.針對(duì)PHLPP1、PHLPP2質(zhì)粒表達(dá)效果的檢測，可見在U251細(xì)胞中外源性的PHLPP1、PHLPP2蛋白可以顯著表達(dá);
　　2.過表達(dá)PHLPP1、PHLPP2后，Akt蛋白表達(dá)總量沒有明

4、顯變化，p-Akt，PKC的蛋白表達(dá)量均降低，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);
　　3.與空載組相比，在24h，48h過表達(dá)PHLPP1，PHLPP2組劃痕處細(xì)胞數(shù)目減少，差異有顯著性(P＜0.01）;
　　4.Transwe ll侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)染PHLPP1、PHLPP2基因48h后細(xì)胞侵襲數(shù)目明顯低于對(duì)照組（P＜0.01）;
　　5.CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)證實(shí)轉(zhuǎn)染PHLPP1、PHLPP2基因后隨著時(shí)間變

5、化過表達(dá)組細(xì)胞增殖能力明顯低于對(duì)照組;
　　6.過表達(dá)PHLPP1、PHLPP2基因后，通過Western-blot檢測到過表達(dá)組與對(duì)照組相比N-cadherin、β-catenin、Bcl-2的蛋白表達(dá)量明顯降低。
　　結(jié)論：1.PHLPP基因能夠抑制Akt的活化，影響PKC的穩(wěn)定性。
　　2.PHLPP基因抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
　　3.PHLPP基因抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力。
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