新生兒聽力及基因聯(lián)合篩查106,513例結(jié)果分析與技術(shù)研發(fā)及臨床意義研究.pdf

1、最早的新生兒聽力篩查工作起始于1964年,其在我國的開展也已經(jīng)超過10年,迄今已在早期發(fā)現(xiàn)聾病方面取得了卓越成效。隨著新生兒聽力篩查工作的廣泛開展和臨床經(jīng)驗(yàn)的積累,逐漸發(fā)現(xiàn)在新生兒聽力篩查中存在一些局限,即并不是所有的聽力損失均會在出生后立即表現(xiàn)。那么,對于遲發(fā)型聽力損失,則新生兒的聽力篩查似乎就更顯得無能為力了。遺傳學(xué)的研究和分子流行病學(xué)的數(shù)據(jù)使我們認(rèn)識到遺傳基因在維護(hù)聽力健康和發(fā)現(xiàn)聽力異常中的重要性。檢出這些已經(jīng)發(fā)病或潛在的聽力損失

2、者的最佳方法是對所有新生兒的血斑進(jìn)行遺傳學(xué)分子篩查,以便發(fā)現(xiàn)他們是否具有引起遲發(fā)性聽力損失的高危病因。2007年,王秋菊教授提出了在廣泛開展的新生兒聽力篩查的基礎(chǔ)上,融入聾病易感基因分子水平篩查的理念,在新生兒出生時或出生后3天內(nèi),除了進(jìn)行常規(guī)的聽力篩查外,同時進(jìn)行新生兒聾病常見易感基因的篩查,策略上包括普遍人群篩查和目標(biāo)人群篩查。本研究正是基于此理念展開,共分為三個部分:
　　第一部分：新生兒聽力及基因聯(lián)合篩查106,513例研

3、究報(bào)告
　　本課題組應(yīng)用專有的含有聽力篩查信息和血樣信息的新生兒遺傳疾病篩查采樣卡,可以方便快捷準(zhǔn)確地進(jìn)行了新生兒聽力及基因的同步篩查,發(fā)現(xiàn)了具有重要臨床意義的研究結(jié)果。本研究發(fā)現(xiàn),在106,513例新生兒中,總計(jì)有4,192例(4個位點(diǎn)3,055例+16個位點(diǎn)1,137例)存在常見耳聾基因的突變,其中205例為“未通過”,3,987例為“攜帶者”。而更為重要的是在這205例“未通過”者中有169例為MTRNR1基因m.1555A

4、>G或m.1494C>T突變者,意味著這169名新生兒將對氨基糖苷類藥物極其敏感,如果接觸藥物將產(chǎn)生不可逆的耳聾情況。另外,令人興奮的是發(fā)現(xiàn)了多達(dá)3987例耳聾基因的致病突變的攜帶者,這些攜帶者在未來的婚配中,如果與同樣基因型的攜帶者婚配將有25％的概率產(chǎn)生耳聾后代。結(jié)合GJB2、GJB3、SLC26A4和MTRNR1四個基因的篩查,發(fā)現(xiàn)本研究中的新生兒總體的三個耳聾基因的4個致病突變的攜帶率達(dá)到了2.87%(3,055/106,513

5、),天津地區(qū)四個耳聾基因20個致病突變的攜帶率達(dá)到了5.65%(3,298/58,397),本研究中總共發(fā)現(xiàn)致病基因攜帶率為3.94%(4,192/106,513)。這個數(shù)字比通過聽力篩查得到的重度聾的0.1%高出了39倍,而更為重要的是其中大部分難以通過目前的聽力篩查手段得以發(fā)現(xiàn)。本結(jié)果為新生兒聽力和基因聯(lián)合篩查的開展和推廣提供了理論基礎(chǔ)和依據(jù)。
　　第二部分：新生兒聾病易感基因快速篩查試劑盒的研發(fā)與臨床驗(yàn)證
　　第一章：

6、新生兒聾病易感基因快速篩查試劑盒的研發(fā)
　　本研究以四引物擴(kuò)增受阻PCR(ARMS-PCR)為技術(shù)原理,建立了針對人線粒體MTRNR1基因m.1555A>G,m.1494C>T突變、SLC26A4基因c.919-2A>G突變、GJB2基因c.235delC突變四個位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測的技術(shù)方法;本研究最終獲得了分別針對四個位點(diǎn)的多重PCR反應(yīng)體系,包括核心制劑配制方法、PCR反應(yīng)程序、基因型分析方法;本研究所獲得的反應(yīng)體系對四個位點(diǎn)

7、的基因型分析具有特異性,對DNA樣品的敏感度達(dá)到了104個拷貝數(shù)。
　　第二章：新生兒聾病易感基因快速篩查試劑盒的臨床驗(yàn)證
　　本課題組應(yīng)用自主設(shè)計(jì)并擁有專利的耳聾基因快速篩查試劑盒,可以方便快捷地進(jìn)行新生兒四個常見耳聾突變(GJB2c.235delC;SLC26A4c.919-2A>G;MTRNR1mt.1555A>Gandmt.1494C>T)篩查,根據(jù)12,224例新生兒的臨床驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)篩查結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確,陽性結(jié)果經(jīng)直

8、接測序驗(yàn)證未見假陽性。
　　本研究發(fā)現(xiàn),在參與篩查的共計(jì)12,224例新生兒中,有258例存在常見耳聾基因的突變,其中有22例為線粒體MTRNR1基因m.1555A>G或m.1494C>T突變者,意味著這些新生兒將對氨基糖苷類藥物極其敏感,如果接觸微量耳毒性藥物將產(chǎn)生不可逆的耳聾。本篩查方案還篩查出3例GJB2基因c.235delC純合突變者,這3例新生兒的聽力篩查皆未通過,做到了早期確診耳聾及其病因,為下一步早期干預(yù)或接受電子耳

9、蝸手術(shù)提供依據(jù)。另外,本研究還發(fā)現(xiàn)了233例GJB2c.235delC和SLC26A4c.919-2A>G雜合突變攜帶者,這些新生兒中的大部分都通過了常規(guī)新生兒聽力篩查,這些攜帶者在未來的婚配中,如果與同樣基因型的攜帶者婚配將有25%的概率產(chǎn)生耳聾后代。
　　第三部分：新生兒聽力與基因聯(lián)合篩查結(jié)果解讀與篩查模式探討
　　對耳聾基因篩查的結(jié)果,必須結(jié)合聽力篩查的結(jié)果來聯(lián)合進(jìn)行,新生兒基因篩查的結(jié)果報(bào)告形式也是以“通過”和“未通

10、過”來表示。本研究結(jié)果使我們發(fā)現(xiàn)了那些耳聾基因的攜帶者和致病突變患兒,其中很大一部分用目前的聽力篩查方法均顯示為“通過”,然而家長沒有意識到這些嬰幼兒卻存在著潛在的致聾危機(jī)。本研究發(fā)現(xiàn)的MTRNR1m.1555A>G或m.1494C>T突變的新生兒,在獲知基因篩查的結(jié)果之后,就可以做到有效地避免接觸藥物而保持一個很好的聽力。由于線粒體突變屬于母系遺傳,還可以避免其耳聾的傳遞。
　　本研究通過對已開展的多中心新生兒聽力和基因聯(lián)合篩查