運(yùn)用T7噬菌體展示技術(shù)篩選乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：構(gòu)建含乙型肝炎病毒(HBV)Presl基因的原核表達(dá)載體并在大腸桿菌中高效表達(dá)，獲得純化的Presl融合蛋白，并對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行鑒定，為進(jìn)一步從人肝細(xì)胞cDNA表達(dá)文庫中篩選Presl相互作用蛋白奠定基礎(chǔ)。 方法：采用PCR法擴(kuò)增含HindlII與XbaⅠ酶切位點(diǎn)的Presl基因片段，原核表達(dá)載體pGST-MOLUC及PCR產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后，用T4DNA連接酶將兩者連接并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109構(gòu)建并篩選重組質(zhì)粒。隨后將重組質(zhì)粒

2、轉(zhuǎn)入表達(dá)宿主菌BL21感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，對(duì)表達(dá)蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析和Western-blot檢測。以谷胱甘肽—Sepharose4B凝膠為填料進(jìn)一步采用親和層析純化融合蛋白。 結(jié)果：用PCR方法擴(kuò)增出與預(yù)期大小一致的目的基因片段。重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切鑒定及測序分析證實(shí)重組質(zhì)?？寺〕晒?，命名為pGST-Presl。轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌后成功誘導(dǎo)出分子量為37kD的GST—Presl融合蛋白，與預(yù)期分子量相符，誘導(dǎo)表