乙型肝炎病毒復(fù)制與肝細(xì)胞核酸識(shí)別受體相互作用研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩56頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  在持續(xù)表達(dá)HBV的HepG2.215細(xì)胞模型及pBS-HBV1.3瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞模型中觀察HBV復(fù)制對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)核酸識(shí)別受體及相關(guān)分子表達(dá)的影響;比較HBV(+)肝癌組織與HBV(-)肝癌組織IFI16的表達(dá)差異,并探討HBV復(fù)制與細(xì)胞內(nèi)DNA識(shí)別受體IFI16的相互作用及其機(jī)制。
  方法:
  1.提取HepG2及HepG2.215細(xì)胞總RNA,RT-qPCR檢測(cè)核酸識(shí)別受體及相關(guān)分子的表達(dá);

2、>  2.采用pBS-HBV1.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系(HepG2,Huh7),分別在不同時(shí)間點(diǎn)提取細(xì)胞總RNA,RT-qPCR檢測(cè)核酸識(shí)別受體及相關(guān)分子的表達(dá);
  3.采用IHC及RT-qPCR檢測(cè)HBsAg(+)與HBsAg(-)肝癌患者肝組織及外周血白細(xì)胞IFI16表達(dá);RT-qPCR,Western blot,IF及激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)IFI16在HepG2.215細(xì)胞和HepG2細(xì)胞中的表達(dá)及分布模式;
  4.采

3、用pBS-HBV1.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系(HepG2,Huh7),在0h,12h,24h,36h,48h后分別提取細(xì)胞總RNA及蛋白,RT-qPCR及Western blot檢測(cè)IFI16的表達(dá);ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中HBsAg和HBeAg表達(dá)水平;
  5.采用不同濃度IFI16-FL與pBS-HBV1.3質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞,ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清中HBsAg和HBeAg表達(dá)水平;RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞上清中HBV-DN

4、A水平;同樣方法檢測(cè)HepG2.215細(xì)胞過(guò)表達(dá)IFI16對(duì)HBV復(fù)制和表達(dá)的影響;
  6.比較HBsAg(+)與HBsAg(-)肝癌患者外周血白細(xì)胞中IFI16,IRF3,IFN-β,NF-κB等的表達(dá)情況;IFI16-FL與pBS-HBV1.3質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞或IFI16-FL單獨(dú)轉(zhuǎn)染HepG2.215細(xì)胞,RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞中IFI16,IRF3,IFN-β,NF-κB等表達(dá)情況。
  結(jié)果:
  

5、1.RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果表明,與HepG2細(xì)胞相比,HepG2.215細(xì)胞中上調(diào)的基因包括RIG-I,MDA-5和MyD88等;下調(diào)的基因包括IFN-β,IRF-3和IFI16等;
  2.pBS-HBV1.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞系(HepG2,Huh7)后可以啟動(dòng)短暫的固有免疫應(yīng)答,激活RIG-I,IFI16等核酸識(shí)別受體一過(guò)性升高;
  3.IHC結(jié)果顯示HBsAg(+)肝癌組織中IFI16蛋白呈陰性表達(dá),HBsAg(-)

6、肝癌組織中呈中度陽(yáng)性表達(dá);HBsAg(+)組外周血白細(xì)胞中IFI16 mRNA水平亦低于HBsAg(-)組;HepG2.215細(xì)胞中IFI16 mRNA的表達(dá)水平顯著低于HepG2細(xì)胞,IFI16蛋白表達(dá)量與HepG2細(xì)胞相比也顯著降低,其表達(dá)均在細(xì)胞核內(nèi);
  4.pBS-HBV1.3質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2和Huh7后,Western blot和RT-qPCR檢測(cè)顯示IFI16的mRNA及蛋白表達(dá)水平隨時(shí)間延長(zhǎng)而遞減;ELISA結(jié)果

7、顯示細(xì)胞培養(yǎng)上清中HBsAg和HBeAg的分泌隨時(shí)間延長(zhǎng)而遞增;
  5.隨著轉(zhuǎn)染IFI16真核表達(dá)質(zhì)粒的增加,HepG2細(xì)胞上清中HBV-DNA及HBsAg和HBeAg含量逐漸下降,HepG2.215細(xì)胞中檢測(cè)到相似作用;
  6.共轉(zhuǎn)染IFI16-FL與pBS-HBV1.3質(zhì)粒后RT-qPCR檢測(cè)HepG2細(xì)胞中IRF3,IFNβ,NF-κB等基因的表達(dá)相對(duì)上調(diào);HepG2.215細(xì)胞轉(zhuǎn)染IFI16-FL質(zhì)粒后上述基因的

8、表達(dá)亦相對(duì)上調(diào)。
  結(jié)論:
  1.HepG2細(xì)胞與持續(xù)表達(dá)HBV的HepG2.215細(xì)胞之間以及轉(zhuǎn)染與未轉(zhuǎn)染pBS-HBV1.3質(zhì)粒的肝癌細(xì)胞系之間核酸識(shí)別受體及相關(guān)分子的表達(dá)存在差異,這些差異表達(dá)的分子有可能與HBV持續(xù)感染的發(fā)生相關(guān);
  2.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和持續(xù)表達(dá)HBV的肝癌細(xì)胞系中IFI16表達(dá)下調(diào),提示HBV復(fù)制對(duì)IFI16的表達(dá)具有抑制作用,IFI16過(guò)表達(dá)亦可能通過(guò)IFI16-STING-IRF3-IFN

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論