MGb2-Ag在結(jié)直腸癌的表達(dá)及預(yù)后研究.pdf

1、【背景】
　　近二十年來，本實驗室一直致力于胃腸道腫瘤的早期診斷和治療。MGb2是我室利用淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)自行制備的一株胃癌特異性單克隆抗體。前期大量研究證實，MGb2的抗原即MGb2-Ag對胃癌具有良好的診斷和預(yù)后判斷價值。近期工作主要集中于MGb2-Ag的抗原鑒定上，利用我室蛋白組學(xué)的優(yōu)勢平臺，初步鑒定MGb2-Ag為TRAK1，后續(xù)的驗證及分子機(jī)制尚在進(jìn)行中。MGb2-Ag在胃癌的發(fā)展過程中扮演著重要作用，但其在結(jié)直腸癌中

2、的功能研究尚少，還需要進(jìn)行系統(tǒng)深入的研究。
　　【目的】
　　1.檢測MGb2-Ag是否在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)。
　　2.分析MGb2-Ag的表達(dá)是否與結(jié)直腸癌患者的總生存率相關(guān)。
　　3.初步探索MGb2單抗對胃腸道腫瘤細(xì)胞生長有無抑制作用。
　　【方法】
　　1.收集140例結(jié)直腸癌臨床組織樣本，通過免疫組化法檢測MGb2-Ag在其中的表達(dá)分布情況。
　　2.通過非參數(shù)檢驗，分析MGb2的表達(dá)

3、程度與病理分化、侵襲深度、有無轉(zhuǎn)移等因素的相關(guān)性。
　　3.通過臨床隨訪（5年）和生存分析，篩選出影響患者總生存時間的相關(guān)因素。
　　4.采用Westernblot在結(jié)直腸癌組織和多個細(xì)胞系中檢測MGb2-Ag的表達(dá)，初步確定目的條帶及其表達(dá)模式。
　　5.運用激光共聚焦顯微鏡觀察MGb2-Ag的亞細(xì)胞定位。
　　6.流式細(xì)胞儀檢測MGb2單抗對AGS細(xì)胞凋亡的影響。
　　【結(jié)果】
　　1.MGb2-

4、Ag在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)水平顯著高于正常組織。
　　140例結(jié)直腸癌組織標(biāo)本中，MGb2-Ag的表達(dá)陽性率為86.71％。其中20例（14.29％）表達(dá)為陰性(-)，60例（46.43％）表達(dá)為弱陽性(+)，40例（28.57％）表達(dá)為中等陽性(++)，15例（10.71％）表達(dá)為強(qiáng)陽性(+++)。
　　2.MGb2-Ag的表達(dá)與結(jié)直腸癌組織分化程度(p=0.006)、浸潤深度(p=0.049)、臨床病理分期(p=0.03

5、2)具有顯著相關(guān)性。但是并未發(fā)現(xiàn)MGb2-Ag的表達(dá)水平與病人的年齡、性別、淋巴結(jié)侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性(p值分別為0.586、0.308、0.910和0.068)。
　　3.Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)：MGb2-Ag表達(dá)程度越高，結(jié)直腸癌病人的總生存時間越短（log-rank檢驗：p<0.001）。結(jié)直腸癌患者的術(shù)后平均及中位生存時間分別為41.011±1.75個月、50個月。MGb2-Ag陰性表達(dá)的結(jié)直腸癌患者術(shù)后

6、平均生存時間為48.7±3.934個月，而MGb2-Ag弱陽性、中等陽性以及強(qiáng)陽性表達(dá)的患者術(shù)后平均生存時間分別為44.57±2.19個月，34.76±2.8個月和19.53±4.24個月。通過單變量分析，MGb2-Ag過表達(dá)、腫瘤侵襲、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及臨床病理分期與結(jié)直腸癌患者的生存時間顯著相關(guān)。
　　將單變量分析篩選的相關(guān)因素納入Cox風(fēng)險比例模型。以校正的MGb2-Ag陰性表達(dá)組（-）HR=1.00作為參考值，弱陽性組（+）、中

7、度陽性組（++）和強(qiáng)陽性組（+++）的HR值分別為1.328(p=0.532)，2.88(p=0.019)和6.7509(p<0.001)。單變量和多變量分析結(jié)果均提示MGb2-Ag過表達(dá)和腫瘤的分化程度是兩個獨立的預(yù)測結(jié)直腸癌預(yù)后的因素。
　　4.Westernblot結(jié)果顯示，MGb2-Ag在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞中表達(dá)均高于正常對照，細(xì)胞系中尤以SW480為著。MGb2-Ag表達(dá)模式為兩條蛋白帶，分子量約為100kDa和120k

8、Da。
　　5.MGb2-Ag在胞漿和胞膜上均有表達(dá)，但主要定位于細(xì)胞膜上。
　　6.MGb2單抗可誘導(dǎo)AGS細(xì)胞發(fā)生早期凋亡并且呈劑量依賴性。
　　【結(jié)論】
　　1.本研究率先觀察了MGb2-Ag在結(jié)直腸癌中的表達(dá)分布情況，發(fā)現(xiàn)MGb2-Ag可以作為一個潛在的預(yù)測結(jié)直腸癌患者預(yù)后的重要分子標(biāo)志物。
　　2.MGb2-Ag在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞中高表達(dá)且兩條蛋白帶，與我們前期在胃癌中的發(fā)現(xiàn)較為一致。這提示MG