版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:探討樹突狀細(xì)胞培養(yǎng)方法,TAK1信號(hào)通路在DC分化、發(fā)育及1型糖尿?。╰ype1 diabetes mellitus,T1DM)發(fā)病過(guò)程中的分子作用機(jī)制。通過(guò)體外培養(yǎng)骨髓來(lái)源的DC,從形態(tài)學(xué)、表型及功能給予鑒定,進(jìn)而建立體外培養(yǎng)DC的方法。通過(guò)體外觀察TAK1抑制劑(5z-7-oxozeaenol)對(duì)DC形態(tài)學(xué)、凋亡、表型、功能以及蛋白TLR4、TAK1、JNK、AP-1及NF-κB表達(dá)水平的影響;體內(nèi)觀察TAK1抑制劑對(duì)T1DM
2、小鼠的治療作用,明確其治療T1DM的作用及可能的分子作用機(jī)制;觀察TAK1抑制劑作用的DC在T1DM小鼠中的作用,從而進(jìn)一步明確TAK1抑制劑是否通過(guò)DC在T1DM發(fā)病過(guò)程中的發(fā)揮作用。
方法:(1)體外分離C57BL/6小鼠的骨髓,制取細(xì)胞懸液,通過(guò)加入不同刺激因子如巨噬細(xì)胞粒細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、白介素-4(Int
3、erleukin-4,IL-4)進(jìn)行干預(yù),于實(shí)驗(yàn)第7天通過(guò)檢測(cè)CD11c的表達(dá)觀察不同培養(yǎng)條件下小鼠骨髓源細(xì)胞向DC分化情況及檢測(cè)CD86,MHC-Ⅱ的表達(dá)和當(dāng)DC與脾淋巴細(xì)胞比例為1:20時(shí)進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)來(lái)觀察對(duì)DC功能的影響。
(2)通過(guò)上述培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的C57BL/6小鼠骨髓源DC,于實(shí)驗(yàn)第6、7天分別加入LPS作用24h及不同劑量的TAK1抑制劑(0.9μg.ml-1、1.8μg.ml-1)作用4h后于顯微鏡下
4、觀察細(xì)胞形態(tài),收集細(xì)胞,取部分細(xì)胞用于檢測(cè)其表面抗原CD11c、MHC-Ⅱ和CD86的陽(yáng)性表達(dá)率、凋亡情況及檢測(cè)TAK1抑制劑對(duì)DC刺激同種異體脾淋巴細(xì)胞增殖活性的影響,另取部分細(xì)胞用于檢測(cè)其對(duì)TLR4、TAK1、JNK、AP-1及NF-κB蛋白表達(dá)的影響。
(3)C57BL/6小鼠在SPF環(huán)境中適應(yīng)性培養(yǎng)1周后,于腹腔連續(xù)5次注射小劑量鏈脲佐菌素(40 mg.kg-1,STZ)溶液,注射完72小時(shí)后,測(cè)定血糖,小鼠血糖≥16
5、.7 mmol.l-1,即判斷T1DM造模成功。造模成功后將小鼠隨機(jī)分為:正常對(duì)照組、模型組、TAK1抑制劑高劑量組(75μg.kg-1)、TAK1抑制劑低劑量組(37.5μg.kg-1)。小鼠于造模當(dāng)天給予相應(yīng)的TAK1抑制劑,每周給藥1次,連續(xù)4周。每周檢測(cè)血糖及體重1次。末次給藥后,觀察一段時(shí)間,于實(shí)驗(yàn)的第44天將小鼠安樂(lè)死,分離脾臟和骨髓,制取淋巴細(xì)胞懸液,檢測(cè)小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖能力及骨髓來(lái)源DC表型和功能的影響。取部分胰
6、腺用于HE染色,觀察小鼠胰島β細(xì)胞的炎性浸潤(rùn)情況。另取部分胰腺和脾臟用于檢測(cè)其對(duì)TAK1、JN K和N F-κB蛋白表達(dá)的影響。
(4)于C57BL/6小鼠造模,造模完成后當(dāng)天給予處理過(guò)的DC細(xì)胞,每周檢測(cè)血糖及體重1次,實(shí)驗(yàn)的第42天處死小鼠,分離脾臟制取淋巴細(xì)胞懸液,檢測(cè)小鼠T、B淋巴細(xì)胞的增殖能力。另取部分胰腺和脾臟用于Wester nblot檢測(cè)其對(duì)蛋白TAK1、JNK和NF-κB的影響。
結(jié)果:(1)GM-
7、CSF能夠促進(jìn)骨髓來(lái)源的細(xì)胞向DC分化,IL-4主要能夠影響已分化DC的成熟程度,不能夠促進(jìn)骨髓來(lái)源細(xì)胞向DC分化。
(2) TAK1抑制劑能夠明顯促進(jìn)DC的凋亡,且其能夠下調(diào)DC表面共刺激分子CD86及MHC-Ⅱ的陽(yáng)性表達(dá)率,呈現(xiàn)一定的劑量依賴性;其并能夠下調(diào) DC對(duì)同種淋巴細(xì)胞增殖的能力。TAK1抑制劑能夠劑量依賴性下調(diào)TLR4、TAK1和N F-κB的表達(dá),且一定程度的上調(diào)JN K和AP-1的表達(dá)。
(3)采用
8、STZ可以建立C57BL/6小鼠T1DM模型,表現(xiàn)為小鼠血糖水平≥16.7 mmol.l-1,多飲,多尿。與模型組相比,給藥組小鼠體重?zé)o明顯變化。與模型組比較,給藥組小鼠血糖水平明顯降低(P<0.05)。在脾臟T、B淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)中,與T1DM模型組相比,TAK1抑制劑顯示出較為明顯的劑量依賴性抑制T淋巴細(xì)胞增殖的作用(P<0.05),對(duì)B淋巴細(xì)胞無(wú)明顯影響;混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)顯示,與T1DM模型組比較,給藥組小鼠DC在20:1的刺激比
9、下可劑量依賴性的降低對(duì)同種異體T淋巴細(xì)胞的增殖作用;FACS結(jié)果顯示,與T1DM模型組比較,給藥組小鼠DC表面抗原刺激分子CD86、MHC-Ⅱ的表達(dá)明顯下降,且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。與模型比較,TAK1抑制劑能夠減輕胰島β細(xì)胞的炎性浸潤(rùn),且呈現(xiàn)劑量依賴性。與模型組相比,給藥組小鼠體內(nèi)TAK1和NF-κB的表達(dá)明顯降低,JNK的表達(dá)明顯升高。
(4)與模型組比較,各DC組小鼠體重?zé)o明顯差異,血糖高于模型組。在脾臟T、B淋巴細(xì)胞增
10、殖實(shí)驗(yàn)中,與模型組比較,給予DC后對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖明顯增加。在蛋白檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中,與空白組比較,模型組及DC組小鼠體內(nèi)TAK1、JNK表達(dá)無(wú)明顯變化,NF-κB的表達(dá)水平明顯增加。
結(jié)論:(1)綜上所述,加入GM-CSF為骨髓來(lái)源DC最佳體外培養(yǎng)條件,且為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供一定的理論依據(jù)。
(2)TAK1信號(hào)通路在DC存活中扮演著重要的角色,TAK1抑制劑能夠通過(guò)影響DC的功能及其下游蛋白的表達(dá)來(lái)發(fā)揮抗炎及免疫調(diào)節(jié)的作用。<
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- TAK1信號(hào)通路在高糖誘導(dǎo)骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞激活中的作用.pdf
- 樹突狀細(xì)胞和GSTO1在COPD發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf
- TAK1在糖尿病腎病巨噬細(xì)胞激活中的作用及機(jī)制研究.pdf
- SIRT1在維甲酸信號(hào)通路和干細(xì)胞分化中的作用及機(jī)制研究.pdf
- 樹突狀細(xì)胞在兒童重癥肺炎發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf
- 樹突狀細(xì)胞和GST01在COPD發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf
- TGF—β-Activin信號(hào)通路在干細(xì)胞定向分化過(guò)程中的作用.pdf
- 枸杞多糖對(duì)T1DM胰島β細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf
- Hermap基因?qū)t細(xì)胞分化發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的作用的研究.pdf
- 鈣離子載體在樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)分化中的作用及其信號(hào)機(jī)制.pdf
- TAK1-NF-ΚB信號(hào)通路在AGEs誘導(dǎo)的骨髓來(lái)源巨噬細(xì)胞激活中的作用及機(jī)制.pdf
- 樹突狀細(xì)胞在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制和防治中的作用.pdf
- Toll樣受體信號(hào)通路在調(diào)控樹突狀細(xì)胞成熟中的作用研究.pdf
- TAK1抑制TGF-β1誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究.pdf
- TIM-1信號(hào)通路在IgA腎病小鼠發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf
- Wnt信號(hào)通路在腹壁形成和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化過(guò)程中的作用研究.pdf
- Notch信號(hào)通路在神經(jīng)干細(xì)胞分化過(guò)程中的調(diào)節(jié)作用研究.pdf
- PI3K-AKT信號(hào)通路在小鼠MC3T3-E1細(xì)胞分化—鈣化過(guò)程中相關(guān)作用的研究.pdf
- 漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞在慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf
- TIM-1信號(hào)通路在IgA腎病大鼠發(fā)病機(jī)制中的作用.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論