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文檔簡介
1、目的:
1.依據(jù)膠乳增強免疫比濁法的基本原理,研發(fā)出一種具有自我知識產(chǎn)權(quán)的β2-微球蛋白(BMG)檢測試劑,為臨床提供一種診斷性能好、具有價格優(yōu)勢的試劑。
2.應(yīng)用研究的β2-微球蛋白檢測試劑檢測糖尿病患者血清β2-微球蛋白含量并評價其應(yīng)用價值。
方法:
1.將大小均一的膠乳和碳化二亞胺反應(yīng)進行羧化,然后和商品抗體共價結(jié)合,得到免疫微球。觀察免疫微球和β2-微球蛋白的反應(yīng)情況,確定
2、制備β2-微球蛋白試劑的膠乳直徑、碳化二亞胺用量、β2-微球蛋白抗體用量、攪拌時間及PEG濃度的最佳條件,建立自制試劑在日立7600分析系統(tǒng)下的最佳反應(yīng)體系。并對成品試劑的批內(nèi)、批間變異、線性范圍、檢出限、回收性能、抗干擾性、穩(wěn)定性性能進行評價。
2.采集糖尿病病人(n=150)和健康對照者(n=65)靜脈血和留取糖尿病病人24小時尿液以測定血清β2-微球蛋白、尿素、肌酐以及24小時尿蛋白含量,每一實驗參與者的血清β2-微
3、球蛋白均使用自研試劑和北京利德曼試劑進行測定,依據(jù)24小時尿蛋白結(jié)果對糖尿病病人進行分組,比較各實驗組血清β2-微球蛋白、尿素、肌酐水平的差異,對糖尿病腎病患者血清β2-微球蛋白與尿素、肌酐、24小時尿蛋白量進行相關(guān)性分析,并利用ROC曲線評價β2-微球蛋白診斷糖尿病腎病的效能,以探討糖尿病患者血清β2-微球蛋白檢測的臨床意義。
結(jié)果:
1.膠乳直徑為125nm,碳化二亞胺的最佳用量為8%(w/w),最佳攪拌
4、時間為2小時,膠乳和抗體的最佳比例為4∶1(w/w),PEG最佳濃度2.0%。最佳加樣量為3μl,試劑1加樣量為160μl,試劑2加樣量為40μl,波長600nm,反應(yīng)時間10分鐘。低、中、高三個不同濃度的批內(nèi)CV分別為3.50%、2.89%和2.68%;批間CV分別為3.39%、3.23%和3.88%;線性范圍為0~19.2mg/L;最低檢測限為0.2mg/L;回收率為95.00%~102.50%,平均回收率為98.98%;在血清中血
5、紅蛋白≤10g/L、膽紅素濃度≤340ummol/L和甘油三酯≤10mmol/L時,對β2-微球蛋白的測定沒有顯著性干擾;自研試劑和利德曼試劑的相關(guān)性為0.998;試劑于4-8℃存放可穩(wěn)定放置至少6個月,室溫下能放置3周,37℃至少可放置7天。
2.采用24小時尿蛋白作為分組依據(jù),以24小時尿蛋白<150mg/d為界將糖尿病患者分為35例的單純糖尿病組和115例的糖尿病并腎損害二大組,糖尿病并有腎損害組再依據(jù)24小時尿蛋白
6、量分為24小時尿蛋白為150~1000mg/d的輕度蛋白尿組(n=52)、24小時尿蛋白為1000mg~3500mg/d的中度蛋白尿組(n=43)、24小時尿蛋白大于3500mg/d的重度蛋白尿組(n=20)。
3.正常對照組、單純糖尿病組、輕度蛋白尿組、中度蛋白尿組和重度蛋白尿組血清尿素水平分別為4.94±0.98、5.03±1.58、4.89±2.38、13.42±5.04、20.92±9.78mmol/L。五組血清肌
7、酐水平分別為84.30±21.70、78.47±18.73、80.71±25.23、171.34±101.63、430.16.±183.72μmol/L。五組血清β2-微球蛋白水平分別為1.68±0.71、1.62±0.83、3.51±0.81、6.71±1.12、8.46±1.85mg/L??梢娞悄虿∧I病中,輕度蛋白尿組血清尿素、肌酐水平與正常對照組和單純糖尿組差異沒有統(tǒng)計學意義,中、重度蛋白尿組血清尿素、肌酐水平才與正常對照組、單純
8、糖尿病組、輕度蛋白尿組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。而血清β2-微球蛋白在輕度蛋白尿組即開始顯著升高,與正常對照組和單純糖尿病組差異有統(tǒng)計學意義。糖尿病腎病患者血清β2-微球蛋白與尿素、肌酐及24h尿蛋白均呈明顯的正相關(guān)關(guān)系。利用ROC曲線對各指標診斷糖尿病腎損傷的效能進行分析,結(jié)果為β2-微球蛋白對糖尿病并有腎損害組診斷的敏感性為95.9%,尿素、肌酐對糖尿病并有腎損害組診斷的的敏感性分別為80.1%和78.1%,差異具有統(tǒng)計學意
9、義(P<0.05)。β2-微球蛋白的ROC曲線下面積為0.968,尿素、肌酐的ROC曲線下面積分別為0.798和0.743(P<0.05),顯示β2-微球蛋白在對糖尿病腎損害的診斷上明顯優(yōu)于尿素、肌酐。
4.對自研試劑和利德曼試劑分別檢測血清β2-微球蛋白的結(jié)果進行直線回歸分析,得回歸方程為Y=0.03+0.994X,r=0.999,可以認為兩種試劑具有極佳的正相關(guān)(p<0.01);其中b=0.996,a=0.01065,
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