bGFG對早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟件動物模型內(nèi)囊區(qū)O1和O4表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過比較不同的缺血方式建立與人類早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化相似的PVL動物模型，并探討外源性給予堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)對新生鼠腦室周圍白質(zhì)軟化(PVL，Periventricular Leukomalacia)動物模型的內(nèi)囊區(qū)04、01表達(dá)的影響。
　　 方法：選擇2日齡新生SD大鼠，通過結(jié)扎單側(cè)或雙側(cè)頸總動脈并缺氧(8％O2+92％N2)1小時制備PV

2、L動物模型，并予bFGF干預(yù)，分為假手術(shù)組、單側(cè)結(jié)扎頸總動脈組(單側(cè)組)、單側(cè)干預(yù)組、雙側(cè)結(jié)扎頸總動脈組(雙側(cè)組)、雙側(cè)干預(yù)組。分別于術(shù)后4d比較各組動物的死亡率，動態(tài)觀察各組大鼠的生長發(fā)育情況，于術(shù)后4d，14d，26d比較各組大鼠的體重變化情況，觀察各組大鼠的眼部伴隨癥狀，并分別于術(shù)后4天、11天、18天、25天行腦組織病理檢查及通過免疫組織化學(xué)染色方法和計算機圖像分析技術(shù)檢測各組大鼠各個時點內(nèi)囊區(qū)04、01的表達(dá)情況。
　　

3、 結(jié)果：
　　 1.死亡率比較：雙側(cè)組與單側(cè)組死亡率均較高，兩者與假手術(shù)組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；兩者間相比較其差異也有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.05)；兩者與干預(yù)組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。
　　 2.生長發(fā)育情況
　　 (1)體重情況：五組大鼠的體重有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。雙側(cè)組在各個時間點體重最低，顯著低于假手術(shù)組、雙側(cè)干預(yù)組及單側(cè)組，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義p<0.05)，單側(cè)組

4、體重在術(shù)后26d較假手術(shù)組及單側(cè)干預(yù)組低，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。(2)伴隨眼部癥狀：雙側(cè)組及雙側(cè)干預(yù)組肉眼及裂隙燈檢查均可見不同程度的眼部病變，其他組無眼部病變。
　　 3.腦組織大體病理改變：術(shù)后21天雙側(cè)組及雙側(cè)干預(yù)組腦組織腦室周圍白質(zhì)局部有軟化灶、蒼白區(qū)，前者較重；單側(cè)組可見腦室內(nèi)出血，腦室周圍白質(zhì)局部可見蒼白區(qū)；單側(cè)干預(yù)組僅見腦室內(nèi)出血；假手術(shù)組無明顯異常。各組皮質(zhì)區(qū)大體病理均未見明顯異常。
　　

5、4.光鏡下病理改變：病變主要發(fā)生在腦室周圍白質(zhì)區(qū)，皮質(zhì)下、扣帶回、內(nèi)囊、外囊區(qū)。假手術(shù)組未見異常，雙側(cè)組及雙側(cè)干預(yù)組病變較重。術(shù)后4天，模型組均可見組織結(jié)構(gòu)疏松，神經(jīng)細(xì)胞水腫、壞死，小膠質(zhì)細(xì)胞較多，皮質(zhì)損傷輕微，層次清楚；雙側(cè)組及雙側(cè)干預(yù)組可見皮質(zhì)下及腦室周圍白質(zhì)區(qū)可見液化性壞死，雙側(cè)干預(yù)組腦組織病理改變相對較雙側(cè)未干預(yù)組損害輕；單側(cè)組及單側(cè)干預(yù)組未見液化性壞死。術(shù)后11天及18天，模型組細(xì)胞水腫逐漸消退，細(xì)胞肥大、增生，小膠質(zhì)細(xì)胞增多

6、明顯，皮質(zhì)及白質(zhì)區(qū)小血管逐漸增多，白質(zhì)神經(jīng)纖維較前逐漸增多，且大量膠質(zhì)增生；雙側(cè)組及雙側(cè)干預(yù)組甚有膠質(zhì)瘢痕形成，腦室周圍白質(zhì)有不同程度的萎縮變窄，白質(zhì)局部可見軟化灶，但神經(jīng)纖維較其他組少；單側(cè)組腦室周圍白質(zhì)也有不同程度的萎縮變窄，較雙側(cè)組輕，且膠質(zhì)瘢痕形成較少。術(shù)后25天，模型組小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量較前減少，余同術(shù)后18天。
　　 5.免疫組織化學(xué)染色
　　 (1)O4的表達(dá)：五組大鼠04陽性細(xì)胞數(shù)在各個時間點均有統(tǒng)計學(xué)差異(

7、p<0.01)，術(shù)后4d、11d、18d及25d各組大鼠04陽性細(xì)胞數(shù)差異也有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01)。五組大鼠O4陽性細(xì)胞數(shù)隨著日齡的增加而變化，以假手術(shù)組均值曲線為標(biāo)準(zhǔn)線，各組O4陽性細(xì)胞數(shù)在術(shù)后4d與術(shù)后18d之間各組波動范圍較大，但術(shù)后18d到術(shù)后25d之間趨于穩(wěn)定，并靠近假手術(shù)組水平，且發(fā)現(xiàn)雙側(cè)干預(yù)組與單側(cè)干預(yù)組曲線走形相似，假手術(shù)組與單側(cè)組曲線走形相似，術(shù)后4d到術(shù)后18d，兩種走形方向剛好相反。
　　 (2)O1

8、的表達(dá)：五組大鼠O1陽性細(xì)胞數(shù)在各個時間點均有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)，術(shù)后4d、11d及18d各組大鼠O1陽性細(xì)胞數(shù)也有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01)，術(shù)后25d無統(tǒng)計學(xué)差異(p>0.01)。五組大鼠O1陽性細(xì)胞數(shù)隨著日齡的增加而變化，以假手術(shù)組曲線為標(biāo)準(zhǔn)線，各組在術(shù)后4d與術(shù)后18d之間均呈上升趨勢，術(shù)后18-25d升高的單側(cè)干預(yù)組、雙側(cè)組及雙側(cè)干預(yù)組逐漸下降，三組的大致走形趨勢相似，而單側(cè)組則繼續(xù)緩慢增加，最后各組大鼠均靠近于假手術(shù)

9、組水平。
　　 結(jié)論：
　　 1、通過對2日齡新生SD大鼠進行單側(cè)或雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎加8％缺氧的方法，均可建立與人類早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化病理相似的PVL動物模型，并通過比較發(fā)現(xiàn)，結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈較單側(cè)結(jié)扎頸總動脈腦損傷重，更符合早產(chǎn)兒PVL病理改變。
　　 結(jié)論：
　　 1、通過對2日齡新生SD大鼠進行單側(cè)或雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎加8％缺氧的方法，均可建立與人類早產(chǎn)兒腦室周圍白質(zhì)軟化病理相似的PVL動物模型，