腦紅蛋白(NGB)作用的分子基礎(chǔ)及其在腦缺氧損傷防護(hù)中的意義.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了探討腦紅蛋白作用的分子基礎(chǔ),該研究利用酵母雙雜交系統(tǒng)從人胎腦cDNA文庫中篩選與其有相互作用的蛋白.序列分析表明,酵母雙雜交篩選得到的一個(gè)陽性克隆的編碼產(chǎn)物與Na<'+>,K<'+>-ATPaseβ2亞基(NKA1b2)的C端序列一致.NGB的系列缺失體與NKA1b2亞基C端序列的共轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)證明N端15個(gè)氨基酸是NGB與β2亞基結(jié)合所必需的.隨后采用PCR方法從人胎腦cDNA文庫中擴(kuò)增獲得NKA1b2全長cDNA.GST-pull

2、down實(shí)驗(yàn)表明,原核表達(dá)的NGB與體外轉(zhuǎn)錄翻譯得到的NKA1b2在細(xì)胞外有結(jié)合作用.免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證明二者的生理?xiàng)l件下能夠以復(fù)合物的形式存在.細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明NGB與β2亞基在神經(jīng)元內(nèi)存在共定位.體外實(shí)驗(yàn)表明NGB可以抑制Na<'+>,K<'+>-ATPase的活性,具有顯著的量效關(guān)系.缺氧應(yīng)激條件下NGB表達(dá)被上調(diào)1~2倍,NGB與β2亞基的相互作用仍然存在,β2亞基的表達(dá)不受缺氧調(diào)控.據(jù)量效關(guān)系推算, Na<'+>,K<

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