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1、本課題以新發(fā)現(xiàn)的分別與腦紅蛋白、胞紅蛋白的相互作用蛋白為切入點(diǎn),深入探討新發(fā)現(xiàn)攜氧珠蛋白的缺氧保護(hù)功能機(jī)制。課題分兩部分進(jìn)行: 第一部分中集中于酵母雙雜交篩選到的與腦紅蛋白相互作用蛋白—谷氨酰脯氨酰tRNA合成酶(EPRS)開(kāi)展相關(guān)研究,首先采用一系列生物化學(xué)技術(shù)證明NGB與EPRS之間存在相互作用,并基于EPRS的結(jié)構(gòu)和功能,篩選并驗(yàn)證缺氧敏感性的氨基酰tRNA合成酶成員(ARSs),發(fā)現(xiàn)組氨酰tRNA合成酶、異亮氨酰tRNA
2、合成酶、谷氨酰胺tRNA合成酶以及輔酶因子P43均對(duì)COCl<,2>模擬的缺氧刺激表現(xiàn)出一定的敏感性,為理解ARS在神經(jīng)系統(tǒng)缺氧損傷中的作用奠定基礎(chǔ)以及為明晰NGB抗缺氧的分子機(jī)制提供了一定線索。 第二部分中基于實(shí)驗(yàn)室前期采用酵母雙雜交篩選到的與CGB相互作用的金屬硫蛋白Ⅱ(MT2)開(kāi)展相關(guān)研究。繼前期酵母回轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞熒光共定位實(shí)驗(yàn)之后,首先采用免疫共沉淀技術(shù)驗(yàn)證CGB與MT2在生理水平存在相互作用,然后基于MT2清除重金屬毒
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