新脂肪細(xì)胞因子視黃醇結(jié)合蛋白4與肥胖及脂代謝的關(guān)系及機制研究.pdf

1、本文分三部分研究了新脂肪細(xì)胞因子視黃醇結(jié)合蛋白4與肥胖及脂代謝的關(guān)系及機制。 第一部分，肥胖及2型糖尿病患者血清視黃醇結(jié)合蛋白4水平的臨床研究。 目的：Yang 等利用基因芯片比較了脂肪組織特異性過表達葡萄糖轉(zhuǎn)運子4（GluT4-Tg）和脂肪特異性剔除GluT4（ GluT4（-/-））小鼠附睪脂肪組織的基因表達譜，鑒定出一種新的參與胰島素抵抗發(fā)生的脂肪細(xì)胞因子―視黃醇結(jié)合蛋白4 (RBP4)。然而，RBP4是主要由肝臟

2、合成和分泌，但血清RBP4與肝臟的關(guān)系仍具爭議。RBP4在人群中的研究資料尚少，它在人體內(nèi)的病理生理意義仍需進一步的研究。本研究主要通過臨床研究探討： 1. 血清RBP4在肥胖和2型糖尿病患者中的變化。 2. 血清RBP4與體脂、糖、脂代謝及肝功能的關(guān)系。 3. 血清RBP4與游離脂肪酸以及脂肪細(xì)胞因子，如脂聯(lián)素之間的關(guān)系。 對象與方法： 入選131例上海地區(qū)中國人，年齡20～69歲，分組

3、：正常對照組（NC）（n=31）和正常糖耐量超重/肥胖者（OW/OB-NGT）（n=31）、2型糖尿病正常體重組（NW-T2DM）（n=33）和2型糖尿病伴超重/肥胖組（OW/OB-T2DM）（n=36）。采用HOMA-IR評價各組胰島素抵抗程度，測定受試者的體重指數(shù)（BMI）、腰臀比（WHR），體脂含量（Fat％）；檢測空腹?fàn)顟B(tài)下血糖（FPG）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γGT）、膽固醇（TC）

4、、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、游離脂肪酸（FFA）、胰島素（FINS）、脂聯(lián)素（ADP）和RBP4。 結(jié)果： 1. 校正年齡后，男性的血清RBP4顯著高于女性[(30.00±0.78 vs. 27.27±0.80)μg/ml， P＜0.05]。校正年齡、性別后，OW/OB-NGT 及OW/OB-T2DM組的血清RBP4水平顯著高于NW-NGT組[(29.85±6.

5、60，30.86±6.11) μg/ml vs. 25.47±6.84) μg/ml，均P＜0.05]。 2. NW-T2DM與NW-NGT組間的血清RBP4差異無顯著性(25.47±6.84 vs 28.35±5.42) μg/ml，但顯著低于OW/OB-T2DM [(30.86±6.11 vs. 28.35±5.42)μg/ml， P＜0.05]。 3. 單因素回歸分析見到，血清RBP4與BMI、Fat％、W、W

6、HR、TG及HOMA-IR呈顯著正相關(guān)，未見到RBP4與ALT和γGT有顯著相關(guān)。多元逐步回歸分析見到，WHR，TG和年齡是血清RBP4的獨立相關(guān)因素。 4. 將131名研究對象再次分組：正常甘油三酯伴正常腰臀比組（NTG-NCO）[TG＜1.7mmol/L，WHR≤0.90（男性），WHR≤0.85（女性）]（n=39），正常甘油三酯伴中心性肥胖組（NTG-NCO）（n=43），高甘油三酯伴正常腰臀比組（HTG-NCO）（n

7、=11）和高甘油三酯伴中心性肥胖組（HTG-CO）（n=38）。 小結(jié)： 1. 肥胖者的血清RBP4 顯著升高。 2. 血清RBP4 與WHR，TG，年齡呈正相關(guān)。 3. RBP4 與血糖、血壓、血脂以及中心型肥胖等與胰島素抵抗有關(guān)指標(biāo)有著不同程度的相關(guān)，表明RBP4 是提示代謝綜合征的一項血清學(xué)標(biāo)志物。 4. 肥胖者和糖尿病患者的ALT 和γGT 較高，其肝臟可能存在不同程度脂質(zhì)沉積，但

8、我們未發(fā)現(xiàn)這組人群的血清RBP4 變化與ALT 和γGT 有顯著相關(guān)。 第二部分，視黃醇結(jié)合蛋白4 在大鼠各組織中的表達。 目的：RBP4 在肝臟、腎、脂肪和骨骼肌等多種組織均有合成。本研究通過動物試驗，闡明生理狀態(tài)下RBP4 在機體各組織的表達水平，為研究生理及病理狀態(tài)下RBP4 表達水平變化提供依據(jù)。 材料與方法： 應(yīng)用RT-PCR 和免疫組化的方法，對5 只健康雄性SD 大鼠的主要器官（肝臟、

9、脂肪、骨骼肌、腎臟和心肌組織）RBP4 的表達進行了測定及比較。 結(jié)果： 1. 根據(jù)PCR 產(chǎn)物測序結(jié)果，與Pudmed 上公布的各基因mRNA 標(biāo)準(zhǔn)序列進行比較分析，證實PCR 產(chǎn)物確為我們所需要的目標(biāo)產(chǎn)物。 2. RBP4 在各組織表達強度分別為：肝臟（3.52±0.39），腎臟（3.63±0.63），脂肪（0.64±0.11），肌肉（0.38±0.06）和心臟（0.24±0.10）。 3. R

10、BP4 彌漫分布于肝細(xì)胞以及膽管內(nèi)；充滿腎小管管腔及其上皮組織；散在脂肪細(xì)胞周邊以及骨骼肌和心肌細(xì)胞內(nèi)。 4. 健康雄性SD 大鼠脂肪組織中RBP4 與GluT4mRNA 的表達水平呈負(fù)相關(guān)（相關(guān)系數(shù)r= -0.667，P=0.219），但未達統(tǒng)計學(xué)意義。 小結(jié)： 1. RBP4 在肝臟、脂肪、骨骼肌、腎臟和心肌組織均有表達，以肝臟和腎臟表達最強，脂肪其次，肌肉和心臟最少。 2. RBP4 彌漫分布

11、于肝細(xì)胞以及膽管內(nèi)；充滿腎小管管腔及其上皮組織；散在脂肪細(xì)胞周邊以及骨骼肌和心肌細(xì)胞內(nèi)。 3. 在健康雄性SD 大鼠脂肪組織中，未見到RBP4 與GluT4 的相關(guān)。 第三部分，非諾貝特對高脂、高糖喂養(yǎng)大鼠血清、肝臟及脂肪組織視黃醇結(jié)合蛋白4 表達的影響。 目的：RBP4 新功能的發(fā)現(xiàn)，為治療胰島素抵抗和糖尿病提供了新的靶點。貝特類藥物具有減重和改善胰島素敏感性的功能。動物實驗證明改善胰島素敏感性可降低體內(nèi)

12、RPB4 水平，故推測這類藥也可能有降低體內(nèi)RBP4 水平的作用。本研究通過動物試驗探討： 1. RBP4 在高脂肥胖胰島素抵抗大鼠模型血清、肝臟和脂肪組織中的變化。 2. 非諾貝特對高脂肥胖胰島素抵抗大鼠模型血清、肝臟和脂肪組織中RBP4 和GluT4 水平的影響。 材料與方法： 40 只雄性SD 大鼠隨機分為5 組，普通飲食（NC）組、高脂飲食對照（FC）組和高糖飲食對照（SC）組，高脂飲食治療

13、（FF）組和高糖飲食治療（SF）組，每組8 只大鼠。喂養(yǎng)6 周后，NC 組予生理鹽水，F(xiàn)C 和SC 組予牛奶，治療組予非諾貝特100mg/kg 灌胃2 周后，行口服糖耐量試驗和胰島素耐量試驗檢測胰島功能，取空腹血清檢測血脂和胰島素等，并取附睪、腎周脂肪和肝臟組織稱重，計算脂體比和飼養(yǎng)效率，RT-PCR 檢測附睪脂肪和肝臟組織RBP4 和GluT4 mRNA 表達水平。 結(jié)果： 1. FC 和SC 組大鼠糖耐量和胰島素耐

14、量受損，血脂紊亂，空腹血糖和胰島素升高，脂體比增加，肝臟出現(xiàn)了脂質(zhì)沉積。FC 和SC 組的大鼠血清RBP4 水平顯著高于NC 組1.84 和1.57 倍，附睪脂肪組織RBP4mRNA 水平顯著高于NC組2.47 倍和2.35 倍，而GluT4 顯著低于NC 組1.5 倍和1.37 倍，而三組肝臟RBP4mRNA 水平無顯著差異。 2. 非諾貝特治療后，治療組體重、脂體比和飼養(yǎng)效率有所下降，血脂譜、胰島素敏感性和肝臟脂質(zhì)沉積較對

15、照組均有所改善。FF 組血清RBP4 和附睪脂肪組織RBP4mRNA 水平較FC 組分別下降了20.7％和56.4％；SF 組較SC 組分別下降了24％和52％，治療組附睪脂肪組織GluT4mRNA 水平較對照組均有升高，但各組肝臟RBP4 mRNA 水平無顯著差異。 小結(jié)： 1．成功地制作了高脂、高糖誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠模型。 2．高脂或高糖的飲食結(jié)構(gòu)都可導(dǎo)致肥胖的發(fā)生，并刺激脂肪組織RBP4 的表達增加。RB

16、P4 與血糖，血脂代謝，腹內(nèi)脂肪重量以及胰島素抵抗密切相關(guān)，提示RBP4 可能是一個代謝綜合征的生物學(xué)標(biāo)志物。 3．非諾貝特可以改善血脂，增強胰島素敏感性，減少脂肪RBP4 的表達。 4．胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，脂肪細(xì)胞可能是血清RBP4 主要來源。然而，由于我們未檢測肌肉，腎臟等組織RBP4 的變化，故不能排除PPAR α激動劑對這些組織RBP4 合成的影響以及其他組織對血清RBP4 的貢獻。 結(jié)論 1

17、. RBP4 與血糖、血脂、血壓以及中心型肥胖等與胰島素抵抗有關(guān)指標(biāo)有著不同程度的相關(guān)，提示RBP4 可能是提示代謝綜合征的一項血清學(xué)標(biāo)志物。 2. RBP4 在大鼠肝臟和腎臟表達最強，脂肪次之，而骨骼肌和心肌RBP4 的表達最少。 3. 非諾貝特可以改善血脂，減少腹內(nèi)脂肪含量，增強胰島素敏感性，減少脂肪RBP4 的表達。 4. 在胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，脂肪組織可能是血清RBP4 主要來源。然而，由于未檢測肌肉