2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2(Angiotensin-converting enzyme2, ACE2)是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的同系物,能夠直接催化血管緊張素Ⅱ(Angiotensin II, AngⅡ)轉(zhuǎn)換為血管緊張素1-7(Ang1-7),通過激活Mas受體從而發(fā)揮舒張血管及降低血壓等心血管保護作用。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),頭端延髓腹外側區(qū)(the rostral ventrolateral medulla,RVLM)在血壓和交感神經(jīng)活動調(diào)控方面起到十

2、分關鍵的作用。交感神經(jīng)活動亢進是高血壓的主要特征之一,并與其發(fā)展預后密切相關。中樞AngⅡ增加是高血壓交感輸出增強的重要原因。此外,高血壓交感輸出增強與 RVLM內(nèi)興奮性機制的增強密切(如AngII誘導產(chǎn)生的氧化應激和興奮性氨基酸能的突觸傳遞等)相關。相關研究證實在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR) RVLM內(nèi)通過慢病毒過表達ACE2可以導致一個長期的降血壓效應,但其機制尚未明確。因此,本研究目標是明確RVLM過表達 ACE2降低血壓和減弱中樞

3、交感輸出的機制和途徑。
  目的:本研究工作通過在SHR及WKY大鼠RVLM內(nèi)用慢病毒過表達ACE2后明確血壓和心率變化;通過檢測尿中24小時去甲腎上腺素(norepinephrine, NE)含量以明確交感輸神經(jīng)活動變化;通過檢測 ACE2和血管緊張素 II主要作用受體1型受體(AT1R)的表達變化,明確ACE-AngⅡ-AT1R軸及ACE2-Ang(1-7)-MAS軸的變化;通過檢測通過過氧化物歧化酶(superoxide d

4、ismutase,SOD)和NADPH氧化酶的表達變化,明確ACE2過表達對活性氧族(reactive oxygen species,ROS)生成和消除以及氧化應激影響;通過檢測ACE2轉(zhuǎn)染6周RVLM內(nèi)微透析液中谷氨酸(glutamic acid,Glu)濃度,明確RVLM內(nèi)ACE2過表達對RVLM內(nèi)Glu釋放的影響;通過整體動物實驗,在大鼠RVLM內(nèi)急性微量注射Glu受體阻斷劑,明確ACE2過表達后Glu受體在介導心血管功能調(diào)節(jié)中的

5、作用。通過以上研究,我們將闡明RVLM過表達 ACE2增加內(nèi)源性Ang1-7后降低血壓和減弱中樞交感輸出的機制和途徑。
  方法:采用慢病毒載體將ACE2(Lenti-ACE2)過表達于RVLM,而Lenti-GFP為對照組(不含目的基因的只表達表達綠色熒光蛋白),轉(zhuǎn)染后每周同一時間段無創(chuàng)大鼠尾動脈壓監(jiān)測大鼠血壓及心率變化。運用高效液相色譜檢測大鼠24h尿液中NE濃度,以及RVLM微透析液中谷氨酸含量的變化。運用western-b

6、lot方法檢測RVLM內(nèi)過表達ACE2后ACE2、AT1R、SOD、NADPH氧化酶等蛋白的表達變化。通過整體動物實驗在RVLM內(nèi)微量注射Glu受體阻斷劑,觀察血壓、心率和腎交感神經(jīng)放電變化,以明確Glu受體功能的在介導心血管功能調(diào)節(jié)中的作用。
  結果:
  1.ACE2在RVLM內(nèi)過表達對血壓和心率的影響
  RVLM過表達ACE2對大鼠血壓的影響:轉(zhuǎn)染之前,SHR組與WKY組血壓及心率存在顯著差異(p<0.05)

7、,SHR的收縮壓(SBP,200±11 mmHg),舒張壓(DBP,150±8 mmHg),平均動脈壓(MAP,167±9 mmHg),心率[HR,401±32次/分(bpm)]顯著高于同齡對照WKY的SBP(160±13 mmHg, DBP(114±11 mmHg), MBP(126±12 mmHg),HR(357±24 bpm);轉(zhuǎn)染之前,SHR以及WKY大鼠組內(nèi)轉(zhuǎn)染ACE2組和對照GFP組之間無顯著性差異。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-A

8、CE2組第四周的SBP(190±12 mmHg)、DBP(136±9 mmHg)、MAP(151±9 mmHg)明顯低于SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP的SBP(202±11 mmHg)、DBP(149±9 mmHg)、MAP(166±10 mmHg)。SHR分別轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2組和Lenti-GFP組轉(zhuǎn)染后前3周HR無明顯變化,SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2第四周開始出現(xiàn)降低,第五周開始SHR轉(zhuǎn)染過表達ACE2組的HR(397±2

9、9 bpm)明顯低于SHR轉(zhuǎn)染GFP組的HR(435±37 bpm)。
  2.SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2后對交感神經(jīng)活動的影響
  SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2后6周24小時尿液中NE排出量(0.367±0.075μg/24h)顯著低于SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組的(0.534±0.058μg/24h),與正常WKY組(0.426±0.044μg/24h)相比無差異。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組24小時尿液中去甲

10、腎上腺素含量高于正常WKY組。
  3.ACE2在RVLM內(nèi)過表達對ACE-AngII-AT1R軸的影響
  SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2后ACE2表達(0.103±0.0047)顯著高于 SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組(0.062±0.0051),與正常WKY組(0.0992±0.0056)相比無差異。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組ACE2表達低于正常WKY組。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2后AT1R表達(0.173±0

11、.041)顯著低于SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組(0.5460±0.061),但仍高于正常WKY組(0.0835±0.0043)。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組AT1R表達高于正常WKY組。
  4.ACE2在RVLM內(nèi)過表達對ROS產(chǎn)生的影響
  SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2組SOD1表達(0.247±0.044)顯著高于 SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP(不含目的基因的只表達表達綠色熒光蛋白)組(0.138±0.053),

12、但仍然低于正常WKY組(0.663±0.046)。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組SOD1表達遠低于正常WKY組。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2后NADPH氧化酶主要亞基NOX4表達(0.137±0.023)顯著低于SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組(0.182±0.034),與正常WKY組(0.143±0.029)相比無統(tǒng)計學差異。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組ACE2表達高于正常WKY組。
  5.ACE2在RVLM內(nèi)過表達對RVL

13、M內(nèi)Glu神經(jīng)遞質(zhì)的影響
  SHR轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2后6周RVLM微透析液中Glu含量(622±121μg/L)顯著低于SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組的(1586±285μg/L),但仍然高于正常WKY組(279±145μg/L)。SHR轉(zhuǎn)染Lenti-GFP組RVLM微透析液中Glu含量高于正常WKY組。
  6.ACE2在RVLM內(nèi)過表達對RVLM內(nèi)Glu受體介導的心血管功能的影響
  RVLM內(nèi)轉(zhuǎn)染6周后

14、 RVLM微量注射谷氨酸受體阻斷劑 Kynurenic Acid(Kyn,2.7nmol)后SHR-ACE2組的MAP降低程度(16±3 mmHg)、HR降低程度(20±4 bpm)、腎交感神經(jīng)放電(RSNA)減弱百分比(16.5.±4.6%)均明顯低于 SHR-GFP組的MAP降低程度(26.7±4.4 mmHg),HR降低程度(30.4±6.7 bpm),RSNA減弱百分比(21.3.±4.6%)。但仍然高于WKY組的MAP降低程度

15、(2.2±1.3 mmHg),HR降低程度(4.64±5.2 bpm),RSNA減弱百分比(3.1±5.4%)。
  結論:降低SHR的血壓、心率和交感神經(jīng)活動減弱;SHR的RVLM過表達ACE2后, RVLM內(nèi)AT1R蛋白表達下降,AngⅡ-AT1軸的作用被削弱;SHR的RVLM內(nèi)轉(zhuǎn)過表達ACE2后,SOD1表達上調(diào),NOX4表達下調(diào),RVLM內(nèi)ROS生成減少,去除增加,氧化應激減弱;SHR的RVLM轉(zhuǎn)染Lenti-ACE2后,

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