趨化因子CCL2-CCR2在人早孕期絨毛和滋養(yǎng)細(xì)胞的功能性表達(dá).pdf

1、趨化因子是一組小分子量(8-10KD)蛋白質(zhì)，由70-90個(gè)氨基酸組成，結(jié)構(gòu)和功能上具有一定的相關(guān)性，均通過與細(xì)胞膜表面相應(yīng)的G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合并發(fā)揮各種生物學(xué)作用。早孕母-胎界面含有豐富的趨化因子及其受體，存在著復(fù)雜交織的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，趨化因子及其受體構(gòu)成了滋養(yǎng)細(xì)胞與蛻膜細(xì)胞的相互聯(lián)系，在母-胎免疫耐受中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。作為最早被鑒定的CC類趨化因子之一，CCL2和受體CCR2結(jié)合后，參與炎癥、動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤等相關(guān)疾病的發(fā)生與發(fā)展；但關(guān)

2、于CCL2在早孕母-胎界面的表達(dá)和在母-胎免疫調(diào)節(jié)中的作用有待研究完善。我們課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，人早孕蛻膜組織和蛻膜基質(zhì)細(xì)胞均高水平轉(zhuǎn)錄和翻譯CCL2和CCR2；CCL2/CCR2可能參與蛻膜基質(zhì)細(xì)胞與蛻膜免疫活性細(xì)胞間相互對(duì)話和交流，并維持母-胎界面Th2型免疫偏移。本課題將進(jìn)一步完善前期工作，擬研究CCL2/CCR2在人早孕絨毛組織和滋養(yǎng)細(xì)胞中的表達(dá)和分泌，以解析其在母、胎界面的生物學(xué)調(diào)節(jié)作用。
　　1.趨化因子CCL2/CC

3、R2在早孕絨毛組織的表達(dá)
　　本研究首先從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平探討趨化因子CCL2及其相應(yīng)配體CCR2在人早孕絨毛組織的表達(dá)。采用半定量RT-PCR和免疫組織化學(xué)法研究正常早孕人絨毛組織趨化因子CCL2及其相應(yīng)配體CCR2的表達(dá)。結(jié)果顯示：絨毛組織中等度轉(zhuǎn)錄和翻譯趨化因子CCL2及其受體CCR2。
　　2.趨化因子CCL2及其受體CCR2在早孕絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞的功能表達(dá)
　　采用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法分析CCL2/CCR2在早孕絨毛

4、滋養(yǎng)細(xì)胞和滋養(yǎng)細(xì)胞系Bewo細(xì)胞的定位表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：滋養(yǎng)細(xì)胞和Bewo細(xì)胞中等度表達(dá)CCL2/CCR2。原代培養(yǎng)人滋養(yǎng)細(xì)胞48小時(shí)，收集培養(yǎng)上清檢測(cè)CCL2的分泌水平。ELISA分析發(fā)現(xiàn)：滋養(yǎng)細(xì)胞能持續(xù)分泌CCL2，當(dāng)種植密度為1×106cells/ml時(shí)，48小時(shí)累積分泌濃度為21.42±2.09ng/ml。應(yīng)用外源性CCL2、CCR2受體拮抗劑RS102895、抗CCL2單克隆抗體及ERK/MAPK抑制劑U0126單獨(dú)或共同處理滋

5、養(yǎng)細(xì)胞；然后用3H-TdR摻入法分析其對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞增殖能力的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：外源性CCL2能促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖，抗CCL2單克隆抗體能拮抗內(nèi)源性CCL2對(duì)人滋養(yǎng)細(xì)胞的促增殖作用。CCR2受體拮抗劑RS10289及ERK/MAPK抑制劑U0126能拮抗外源性CCL2對(duì)人滋養(yǎng)細(xì)胞的促增殖作用。
　　綜上所述，本研究分析了CCL2/CCR2在滋養(yǎng)細(xì)胞的表達(dá)；闡明了早孕滋養(yǎng)細(xì)胞通過自分泌CCL2促進(jìn)自身增殖，可能有利于胎盤早期發(fā)育和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定