鼓階途徑內(nèi)耳干預(yù)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ).pdf

1、耳聾是人類常見(jiàn)殘疾之一，其嚴(yán)重影響著人們的生活質(zhì)量。目前臨床上耳聾治療的主要手段有佩戴助聽(tīng)器與電子耳蝸植入等，但它們都有局限性。干細(xì)胞可以作為耳聾治療的一種手段，研究發(fā)現(xiàn)鼓階途徑移植進(jìn)入外淋巴的干細(xì)胞可以遷移到外淋巴區(qū)域，但遷移機(jī)理尚不明確。為了更好地研究鼓階途徑干細(xì)胞移植對(duì)耳聾的治療作用，我們選擇在進(jìn)化上與人類接近的豬為模式動(dòng)物，觀察移植進(jìn)入的干細(xì)胞在耳蝸內(nèi)的存活與分布情況。
　　 第一章阿米卡星致聾大鼠耳蝸鼓階上皮超微結(jié)構(gòu)變

2、化
　　 目的：藥物性耳聾是一種常見(jiàn)的聽(tīng)力損失類型，研究表明其內(nèi)耳形態(tài)主要表現(xiàn)為毛細(xì)胞凋亡，螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元退化等。通過(guò)干細(xì)胞移植來(lái)恢復(fù)受損或缺失的內(nèi)耳細(xì)胞是一種潛在的治療手段。本課題組前期實(shí)驗(yàn)表明干細(xì)胞移植到藥物致聾的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物鼓階，細(xì)胞可以向螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元以及柯蒂氏器區(qū)域遷移，而移植對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物內(nèi)耳干細(xì)胞很少發(fā)現(xiàn)遷移現(xiàn)象，也就是說(shuō)藥物致聾可以促進(jìn)干細(xì)胞在內(nèi)耳的遷移，我們推測(cè)這種遷移的發(fā)生與鼓階上皮結(jié)構(gòu)的改變有關(guān)。內(nèi)耳的鼓階

3、與螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元以及柯蒂氏器區(qū)域不相通，干細(xì)胞由鼓階遷移至這些區(qū)域的途徑還不清楚。本研究是通過(guò)觀察藥物致聾后與正常大鼠的鼓階靠近螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元與柯蒂氏器區(qū)域上皮的結(jié)構(gòu)變化，發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞移植到藥物致聾大鼠內(nèi)耳后發(fā)生遷移的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
　　 材料與方法：實(shí)驗(yàn)組20只7日齡SPF級(jí)SD大鼠連續(xù)7天以200mg/kg/day劑量腹腔注射硫酸阿米卡星，對(duì)照組10只腹腔注射同等體積的生理鹽水。停藥后即刻、7天、14天、21天與28天分別測(cè)試

4、聽(tīng)力，然后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，一側(cè)耳用4％多聚甲醛固定用于冰凍切片，另一側(cè)耳用2.5％戊二醛固定后用于電鏡觀察。
　　 結(jié)果：對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物聽(tīng)力正常，平均閾值在40 dBL(SPL)；內(nèi)耳柯蒂氏器完整，毛細(xì)胞無(wú)缺損，螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元數(shù)目無(wú)減少；鼓階上皮大都排列較緊密，小部分上皮之間存在間隙，但是間隙較小，各組形態(tài)變化不大。實(shí)驗(yàn)組為極重度感音神經(jīng)性聾，平均閾值在105 dBL(SPL)；內(nèi)耳柯蒂氏器破壞，毛細(xì)胞缺失，原來(lái)柯蒂器所在區(qū)域被

5、上皮取代；鼓階上皮間隙經(jīng)歷了從排列相對(duì)緊密一松弛一相對(duì)緊密的過(guò)程，空洞的數(shù)目也經(jīng)歷由少到多再到少的過(guò)程。
　　 結(jié)論：氨基糖苷類藥物不僅可以導(dǎo)致柯蒂器細(xì)胞的缺失，而且還可以造成鼓階側(cè)靠近螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元與柯蒂氏器側(cè)上皮的間隙擴(kuò)大，這種改變是可逆的，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)可以自我恢復(fù)。
　　 第二章豬耳后入路暴露中耳腔可行性探索
　　 目的：在第一部分研究及本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，發(fā)現(xiàn)豬耳在發(fā)育和形態(tài)結(jié)構(gòu)上與人類相似

6、，可利用豬耳為研究對(duì)象來(lái)模擬人類的聽(tīng)覺(jué)疾病。本研究主要為了探索從小型豬耳后入路解剖途徑進(jìn)入中耳腔的可行性。
　　 材料與方法：豬手術(shù)入路探索選取2月齡聽(tīng)力正常體重5-10kg健康貴州小香豬6只，每只豬右耳用于外淋巴移植，左耳當(dāng)做空白對(duì)照。分別在術(shù)后1、2與4周測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物聽(tīng)力變化，然后通過(guò)免疫熒光的方法觀察手術(shù)對(duì)內(nèi)耳的損傷。
　　 結(jié)果：免疫熒光顯示手術(shù)沒(méi)有引起內(nèi)耳毛細(xì)胞造成缺失，但是術(shù)后實(shí)驗(yàn)耳與對(duì)照耳平均閾值均比空白對(duì)

7、照組提高15 dBL，該差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：盡管鼓階途徑外淋巴移植后在一定程度上提高了聽(tīng)力閾值，耳后入路進(jìn)入中耳可以作為暴露內(nèi)耳的一種可行的方法。
　　 第三章正常豬鼓階途徑干細(xì)胞移植的初步觀察
　　 目的：前面我們已經(jīng)探討了豬做為動(dòng)物模型在耳科研究中的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)摸索出一種可行的手術(shù)入路，本實(shí)驗(yàn)的目的在于觀察干細(xì)胞通過(guò)鼓階途徑移植進(jìn)入豬內(nèi)耳后的存活與分布情況。
　　 方法與材料：干細(xì)胞移植實(shí)

8、驗(yàn)中選取2月齡聽(tīng)力正常體重5-10kg健康貴州小香豬6只，每只豬右耳用于干細(xì)胞移植，左耳當(dāng)做空白對(duì)照。分別在術(shù)后1、2與4周測(cè)定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物聽(tīng)力變化，然后通過(guò)免疫熒光的方法觀察干細(xì)胞的存活與分布。
　　 結(jié)果：干細(xì)胞移植后實(shí)驗(yàn)耳比對(duì)照耳平均閾值提高15 dBL，與先前外淋巴組無(wú)差別；全耳蝸切片后免疫熒光未觀察到通過(guò)鼓階途徑移植進(jìn)入的干細(xì)胞在外淋巴中存活，實(shí)驗(yàn)中的細(xì)節(jié)還需改進(jìn)然后做進(jìn)一步的觀察。
　　 結(jié)論：未發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞在內(nèi)耳