兩種海洋來源的吲哚咔唑類化合物抗腫瘤作用的早期成藥性研究.pdf

1、蛋白激酶C(PKC)是動物細(xì)胞內(nèi)一類結(jié)構(gòu)相似、功能不同的絲氨酸/蘇氨酸激酶，作為信號分子，PKC家族在介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖、分化、凋亡及血管生成的信號通路中發(fā)揮至關(guān)重要的作用，PKC已經(jīng)成為抗腫瘤治療的一個靶點。目前已開發(fā)了多種PKC抑制劑，其中已有一些抑制劑進(jìn)入臨床抗腫瘤研究，如UCN-01、PKC412、Rottlerin、Bryostatin-1等，但還存在許多問題，包括藥物體內(nèi)藥效仍不十分理想，靶點專一性較差，毒副作用較強，易產(chǎn)生耐

2、藥性等，針對PKC靶點尋找高效低毒的抗腫瘤藥物仍然具有現(xiàn)實意義與挑戰(zhàn)性。實驗室前期研究中發(fā)現(xiàn)，吲哚咔唑類化合物MDZ-03在分子及細(xì)胞水平靶向抑制PKCβⅡ，體內(nèi)表現(xiàn)出一定的抗腫瘤藥效；雙吲哚馬來酰亞胺類化合物ZWM127在體外PKCβⅡ抑制劑篩選模型表現(xiàn)出較好的活性，且水溶性較好。本文旨在進(jìn)一步考察MDZ-03及ZWM127的抗腫瘤作用，并主要對MDZ-03的進(jìn)行了早期成藥性評價。本研究分為兩個部分：
　　 第一部分：MDZ-

3、03抗腫瘤作用的早期成藥性研究。本部分實驗主要對MDZ-03抗腫瘤作用的早期成藥性進(jìn)行了評價，具體包括MDZ-03體內(nèi)抗腫瘤藥效評價以及MDZ-03早期的安全性評價、藥代動力學(xué)研究及早期吸收評價。⑴在小鼠H22肝癌模型及人肺腺癌A549裸鼠移植瘤模型上，MDZ-03腹腔注射給藥，一天兩次，MDZ-03表現(xiàn)出顯著的抗腫瘤藥效，但是依然存在溶解性差的問題，高劑量組(20mg/kg)小鼠腹腔內(nèi)有藥物析出，體重明顯下降。⑵MDZ-03在小鼠上最

4、大給藥劑量為120mg/kg，小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核實驗結(jié)果顯示，MDZ-03各劑量組的微核率與溶劑組相比較，無顯著性差異，表明MDZ-03無明顯的致突變作用。⑶建立高效液相色譜法(HPLC)檢測血漿生物樣品中MDZ-03的分析方法，方法學(xué)驗證結(jié)果顯示該檢測方法色譜分離選擇性好，回收率高，精密度、靈敏度和定量線性范圍均達(dá)到了體內(nèi)藥物分析的要求。繪制荷瘤小鼠(H22)單劑量腹腔注射30mg/kg MDZ-03后的藥代動力學(xué)曲線，3P97

5、軟件擬合獲得藥代動力學(xué)參數(shù)，小鼠體內(nèi)MDZ-03呈二室模型代謝，具體參數(shù)如下：t1/2β(min)：147.3；T peak(min)：39.5；Cmax(mg·L-1)：2.39；CL(L·kg-1·min-1)：0.067；AUC(mg·min·L-1)：456.66。⑷MDZ-03體外小鼠肝微粒體孵育實驗結(jié)果顯示，與溶劑對照相比較，MDZ-03孵育組出現(xiàn)保留時間在9.64min的代謝產(chǎn)物峰，該色譜峰最大吸收波長與MDZ-03接近，

6、可能為其體外孵育后生成的結(jié)構(gòu)類似物，體系中仍以MDZ-03原型藥物為主。⑸建立CaCo-2細(xì)胞單層模型，考察對MDZ-03的吸收潛性，結(jié)果顯示在此模型上MDZ-03的攝取量較少，HPLC并未檢測到，可初步判斷MDZ-03不適合口服給藥。
　　 第二部分：ZWM127的體內(nèi)外抗腫瘤作用評價。本部分實驗體外考察ZWM127的抗腫瘤作用，并對其作用機制進(jìn)行了初步探討，并進(jìn)一步體內(nèi)評價ZWM127的抗腫瘤藥效。⑴MTT法考察對多種細(xì)胞株

7、的增殖抑制作用，發(fā)現(xiàn)ZWM127在體外對腫瘤細(xì)胞株有選擇性增殖抑制作用，對人慢性白血病細(xì)胞K562及人非小細(xì)胞肺癌A549作用顯著。⑵流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)ZWM127可將K562細(xì)胞及A549細(xì)胞特異性阻滯在G2-M期。⑶ZWM127可明顯下調(diào)K562細(xì)胞及A549細(xì)胞中PKCβⅡ及PKCθ的磷酸化水平，進(jìn)一步抑制PKC下游分子p-AKT、p-GSK3β及p-ERK1/2的表達(dá)，通過激活線粒體途徑誘導(dǎo)K562細(xì)胞及A549細(xì)胞凋亡