一種海洋真菌來源蒽環(huán)類化合物灰綠霉素A抗腫瘤作用的早期成藥性研究.pdf

1、來源于微生物代謝產(chǎn)物的抗腫瘤抗生素一直以來是抗腫瘤藥物的杰出代表,其中以阿霉素(Doxorcubicin)及其衍生物為代表的葸環(huán)類抗腫瘤藥物在臨床上主要用于治療實體瘤、白血病等。但是該類藥物累積心臟毒性等多種毒副作用限制了其治療作用,因此降低毒副作用而保留其抗腫瘤活性一直是這類化合物研究開發(fā)的熱點?；揖G霉素A(Aspergiolide A,ASP-A)是從海洋紅樹林根部海泥的真菌灰綠曲霉Aspergillus glaucusHB1-19

2、中提取獲得的一個結(jié)構(gòu)新穎的具有自主知識產(chǎn)權(quán)的葸環(huán)內(nèi)酯類化合物。
　　本文主要對ASP-A抗腫瘤成藥性進行了早期評價,具體包括以下幾個方面:1、ASP-A抗腫瘤藥效學(xué)研究;2、ASP-AHPLC檢測方法的建立及藥代動力學(xué)研究;3、小鼠組織中ASP-A分布情況評價;4、體外早期吸收評價;5、早期安全性評價。
　　一、AS-.A抗腫瘤藥效學(xué)研究(1)MTT法檢測ASP-A對多種腫瘤細胞的增殖抑制作用。結(jié)果表明ASP-A對Hela、

3、SMMC-7721、SGC-7901等細胞有不同程度的增殖抑制作用,在上述細胞株上作用的IC50值在2～7.07μM濃度范圍內(nèi),說明ASP-A在體外具有廣譜的抗腫瘤細胞增殖活性。(2)蛋白印跡法(Western Blotting)檢測不同濃度ASP-A(2.5μM、5μM、10μM)對人肝癌細胞BEL-7402中凋亡相關(guān)蛋白的影響。BEL-7402經(jīng)ASP-A作用12h后,細胞中與凋亡相關(guān)的蛋白Caspase-9、Caspase-3、C

4、aspase-8、PARP等出現(xiàn)剪切條帶,促凋亡蛋白Bax與凋亡抑制蛋白BCL-2比值升高,DNA斷裂標(biāo)志性蛋白γ-H2Ax表達量增多。提示ASP-A能夠引起細胞DNA斷裂,并有促細胞凋亡的作用。(3)在小鼠肝癌模型中,設(shè)置了空白組、溶劑組、ASP-A高、中、低三個劑量組(45mg/kg,15mg/kg,5mg/kg)、阿霉素組(2mg/kg),腹腔注射,每天給藥,連續(xù)給藥8天。實驗結(jié)果顯示ASP-A高、中、低三個劑量的抑瘤率分別是66

5、％、72％及55.4％,說明ASP-A可以明顯抑制H22移植瘤的生長,有很好的抗腫瘤活性,且對小鼠體重的影響較小。(4)在人肝癌裸鼠移植瘤模型上,ASP-A的給藥濃度分別是28mg/kg,14mg/kg,7mg/kg,腹腔注射連續(xù)給藥21天。結(jié)果顯示ASP-A高、中、低三個濃度對BEL-7402移植瘤的抑制率分別是51.2％、48.8％和40.1％,對裸小鼠的體重影響輕微。
　　二、ASP-A臨床前藥代動力學(xué)、早期安全性等研究

6、r>　　(1)建立ASP-AHPLC檢測方法,采用內(nèi)標(biāo)法定量,經(jīng)方法學(xué)驗證,該方法的專屬性、準(zhǔn)確度、精密度和定量線性范圍均符合新藥成藥性評價相關(guān)規(guī)范的要求。
　　(2)荷瘤小鼠腹腔注射ASP-A兩個劑量(15mg/kg和30mg/kg)后分別于不同時間點采血取樣,經(jīng)HPLC檢測,3P97軟件計算得到相關(guān)的藥代動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果顯示,ASP-A在小鼠體內(nèi)呈二房室模型代謝。兩種濃度下(15mg/kg和30mg/kg)得到的藥代動力學(xué)參數(shù)

7、分別是:t1/2β(min):42.70,47.61;T peak(min):15.33,15.88;Cmax(mg·L-1):20.96,39.50;CL(L·kg-1·min-1):0.011,0.012;AUC(mg·min·L-1):1359.41,2493.94。
　　(3)荷瘤小鼠腹腔注射ASP-A兩個劑量(15mg/kg和30mg/kg),分別在給藥后15min、30min和60min摘取各組織,經(jīng)HPLC分析,評價

8、ASP-A在小鼠組織中的分布。實驗結(jié)果表明ASP-A主要分布在心臟、腎臟和肝臟中。
　　(4)ASP-A在小鼠體內(nèi)最大給藥量為400mg/kg,該劑量遠大于體內(nèi)有效劑量,說明ASP-A在有效劑量下是安全可靠的。小鼠微核實驗結(jié)果顯示,ASP-A最大給藥劑量組的微核率與陰性對照組沒有顯著性差異,表明ASP-A無明顯的致突變作用。
　　(5)手動膜片鉗技術(shù)檢測ASP-A對hERG通道的抑制作用。ASP-A的檢測濃度為1.25μM,