一種吲哚咔唑類化合物MDZ-03的抗腫瘤作用研究以及PKC抑制劑篩選模型的建立.pdf

1、蛋白激酶C(PKC)是一類Ser／Thr蛋白激酶家族,參與細胞內(nèi)多種功能的信號轉導過程,包括增殖、分化、凋亡以及血管生成等。PKC目前已發(fā)現(xiàn)至少11種亞型,按其對Ca2+和甘油二酯(DAG)的依賴性不同,可以分為三個主要的亞家族:經(jīng)典型PKC,新型PKC,非經(jīng)典型PKC以及PKCμ。
　　 早期研究表明。PKC能夠被促腫瘤劑佛波酯(PMA)激活,隨后的大量研究進一步證實PKC在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉移中均發(fā)揮著重要作用,因此將其作

2、為靶點開發(fā)抗腫瘤藥物成為目前研究的熱點。
　　 目前已開發(fā)了多種PKC抑制劑,如UCN-01、PKC412、G06976、Rottlerin、Bryostatin-1、Aprinocarsen等,其中已有一些抑制劑和寡聚核苷酸藥物進入臨床抗腫瘤研究,但是也帶來了許多問題,包括藥物體內(nèi)藥效仍不十分理想,靶點專一性較差,毒副作用較強,易產(chǎn)生耐藥性等,針對PKC靶點尋找高效低毒的抗腫瘤藥物仍然具有現(xiàn)實意義與挑戰(zhàn)性。因此,建立以PKC為

3、分子靶點的抑制劑篩選模型,將為開發(fā)抗腫瘤藥物提供活性篩選的技術平臺。
　　 實驗室前期發(fā)現(xiàn)代號為MDZ-03的化合物對PKCβⅡ激酶活性表現(xiàn)出明顯的抑制作用,并進行了初步的細胞水平抗腫瘤評價。本論文旨在對MDZ-03的體外體內(nèi)抗腫瘤作用進行進一步評價,考察其對多種細胞株的增殖抑制作用以及對細胞周期的影響,并對其作用機制進行了初步探討。此外,建立基于生物發(fā)光原理的PKCα和PKCβⅡ分子水平抑制劑篩選模型,對MDZ-03的一系列類

4、似物進行了篩選,以期尋找靶向更明確,作用更有效的PKC抑制劑抗腫瘤先導化合物。
　　 第—部分:MDZ-03的抗腫瘤作用及機制研究
　　 本部分實驗評價了MDZ-03的體外體內(nèi)抗腫瘤作用,考察其對多種細胞株的增殖抑制作用以及對細胞周期的影響,并對其作用機制進行了初步探討。結果觀察到MDZ-03在體外對人慢性髓系白血病細胞K562、小鼠白血病細胞P388、人肺腺癌細胞A549、人乳腺癌細胞435有選擇性增殖抑制作用；MDZ

5、-03作用使A549細胞漿出現(xiàn)大量空泡；流式細胞術表明MDZ-03將A549細胞周期特異性阻滯于G0／G1期；MDZ-03對荷A549裸小鼠異體移植瘤有體內(nèi)抑瘤作用；WesternBlot考察MDZ-03對A549細胞內(nèi)PKC及其相關信號分子蛋白的影響,發(fā)現(xiàn)MDZ-03對PKCβⅡ、PKCδ、PKCθ均有抑制作用,并且可能不是通過凋亡通路,而是通過自嗜介導細胞的死亡過程。
　　 第二部分:基于生物發(fā)光原理的PKCα和PKCβⅡ分