DNA拓撲異構酶抑制劑的篩選及兩種化合物的酶活抑制機制、抗腫瘤活性研究.pdf

1、本研究首先建立以DNA拓撲異構酶為靶點的抗腫瘤藥物體外篩選模型，利用該模型對不同來源的34個化合物進行了DNA拓撲異構酶抑制劑的篩選。結果發(fā)現釩配合物2號(LMC)、7號、15號、22號，喜樹堿衍生物cpt、cpt-O和海洋天然產物SAD具有DNA拓撲異構酶I(Topo-I)的抑制作用。 本研究選取作用較強的釩配合物LMC和7號化合物對其抑制Topo-I活性的分子機制作了進一步的探討。LMC和7號化合物抑制Topo-I的半數抑制

2、濃度(IC<,50>)分別為16.5μM和8.6μM，均低于羥基喜樹堿(OPT)21.8μM，在實驗中還發(fā)現LMC和7號化合物不能形成Drug-DNA-Fopo-I斷裂復合物；彗星電泳實驗中，也沒有發(fā)現LMC和7號化合物對DNA損傷而產生的彗星現象，而OPT則有明顯的彗星現象。表明LMC和7號化合物與經典Topo-I抑制劑羥基喜樹堿的作用機制不一樣。 電泳遷移率變動分析(EMSA)進一步表明LMC和7號化合物可以抑制1bpo-I

3、與DNA的結合；在EB取代實驗中，LMC和7號化合物可以置換出EB，插入DNA雙鏈中。這些實驗結果表明LMC和7號化合物可以插入DNA雙鏈中，推論LMC和釩7號化合物可能是通過插入DNA雙鏈，引起DNA的構象變化從而阻礙Topo-I與DNA的結合，進而發(fā)揮抑制1bpo-I活性的作用。 在上述工作基礎上，采用MTT法、流式細胞術分別于細胞及動物水平觀察了LMC和釩7號配合物的抗腫瘤作用。結果發(fā)現，LMC對多種腫瘤細胞株A549、H

4、ela、BEL-7402具有明顯抑制生長的作用，最小IC<,50>值為4.2±0.8μM，且可將細胞阻斷在G2／M期，呈劑量依賴性，而對正常細胞株L-02生長無明顯抑制作用；釩7號化合物同樣具有顯著抑制多種腫瘤細胞株A549、Hela、BEL-7402和P388生長的作用，最小IC<,so>值為0.1±0.04uM，對正常細胞株L-02的抑制作用較弱，流式結果表明其可顯著引起A549細胞死亡；體內實驗發(fā)現，LMC能顯著抑制Lewis肺癌