CYLD介導(dǎo)的Fas信號(hào)途徑殺傷肺癌細(xì)胞的相關(guān)研究.pdf

1、目的：探討圓柱瘤基因CYLD的上調(diào)表達(dá)通過(guò)Fas信號(hào)途徑誘導(dǎo)對(duì)肺癌細(xì)胞殺傷的結(jié)果及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：收集5例患者肺腺癌手術(shù)標(biāo)本，癌組織作為實(shí)驗(yàn)組，自身癌旁組織作為對(duì)照組，實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行CYLD基因表達(dá)分析，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)；肺癌細(xì)胞株A549、H460分別進(jìn)行FLAG-CYLD質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，同樣采取實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)轉(zhuǎn)染效果進(jìn)行分析，并建立穩(wěn)定表達(dá)FLAG-CYLD的A549、H460細(xì)胞株；mFasL蛋白與轉(zhuǎn)染前后

2、的A549、H460細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng)，時(shí)間為24小時(shí)，通過(guò)流式細(xì)胞分析Fas信號(hào)途徑對(duì)A549、H460細(xì)胞的殺傷情況；通過(guò)Co-IP及WB分析CYLD蛋白是否使Ub-RIP1蛋白去泛素化，后者是否進(jìn)一步加入Fas信號(hào)誘導(dǎo)形成DISCⅡ，從而誘導(dǎo)對(duì)肺癌細(xì)胞(重點(diǎn)分析A549細(xì)胞)的殺傷。
　　 結(jié)果：在檢測(cè)的5例患者肺腺癌手術(shù)標(biāo)本中，癌組織和癌旁正常組織均有CYLD表達(dá)，但對(duì)照組為實(shí)驗(yàn)組的2.53倍，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)

3、；轉(zhuǎn)染后CYLD基因在A549、H460細(xì)胞的表達(dá)較轉(zhuǎn)染前分別高1.40、1.83倍；與mFasL蛋白共培養(yǎng)的A549、H460細(xì)胞，其死亡均較轉(zhuǎn)染前顯著增加，但主要表現(xiàn)在壞死而并非凋亡的增加；肺癌細(xì)胞A549壞死水平的Co-IP及WB分析表明1)RIP1蛋白與CYLD蛋白、caspase-8蛋白之間均相互作用，2)RIP1蛋白與自身同源的另外一種蛋白R(shí)IP3結(jié)合，其作用在caspase抑制劑zVAD-fmk預(yù)處理后的肺癌細(xì)胞A549細(xì)