CYLD介導的Fas信號途徑殺傷肺癌細胞的相關研究.pdf

1、目的：探討圓柱瘤基因CYLD的上調表達通過Fas信號途徑誘導對肺癌細胞殺傷的結果及相關機制。
　　 方法：收集5例患者肺腺癌手術標本，癌組織作為實驗組，自身癌旁組織作為對照組，實時熒光定量PCR進行CYLD基因表達分析，并進行統(tǒng)計學檢驗；肺癌細胞株A549、H460分別進行FLAG-CYLD質粒轉染，同樣采取實時熒光定量PCR對轉染效果進行分析，并建立穩(wěn)定表達FLAG-CYLD的A549、H460細胞株；mFasL蛋白與轉染前后

2、的A549、H460細胞株進行培養(yǎng)，時間為24小時，通過流式細胞分析Fas信號途徑對A549、H460細胞的殺傷情況；通過Co-IP及WB分析CYLD蛋白是否使Ub-RIP1蛋白去泛素化，后者是否進一步加入Fas信號誘導形成DISCⅡ，從而誘導對肺癌細胞(重點分析A549細胞)的殺傷。
　　 結果：在檢測的5例患者肺腺癌手術標本中，癌組織和癌旁正常組織均有CYLD表達，但對照組為實驗組的2.53倍，并有統(tǒng)計學差異(P<0.05)

3、；轉染后CYLD基因在A549、H460細胞的表達較轉染前分別高1.40、1.83倍；與mFasL蛋白共培養(yǎng)的A549、H460細胞，其死亡均較轉染前顯著增加，但主要表現(xiàn)在壞死而并非凋亡的增加；肺癌細胞A549壞死水平的Co-IP及WB分析表明1)RIP1蛋白與CYLD蛋白、caspase-8蛋白之間均相互作用，2)RIP1蛋白與自身同源的另外一種蛋白RIP3結合，其作用在caspase抑制劑zVAD-fmk預處理后的肺癌細胞A549細