hSSTR2基因轉(zhuǎn)染肺癌細胞的腫瘤核素顯像與殺傷研究.pdf

1、目的:將人生長抑素受體2亞型（hSSTR2）基因轉(zhuǎn)染至該受體表達陰性的腫瘤細胞，研究125I－伐普肽(RC-160)與其結(jié)合的規(guī)律，以及131I－RC-160對轉(zhuǎn)染腫瘤細胞的殺傷作用，并進行該受體介導的腫瘤顯像研究。
　　方法:1.應用反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）方法獲得hSSTR2基因并構(gòu)建真核表達載體；2.將hSSTR2基因轉(zhuǎn)染至hSSTR2表達陰性的肺腺癌A549細胞系，RT-PCR及流式細胞術(shù)檢測受體的表達，并篩選hSST

2、R2的高表達的細胞株；3.采用放射性配基結(jié)合分析法，以125I－RC-160為放射性配基，對高表達hSSTR2基因的細胞株進行該受體體外結(jié)合特性研究；4.采用四甲基偶氮唑藍（MTT）法測不同濃度131I-RC-160、Na131I、RC-160對轉(zhuǎn)染細胞作用24、48、72和96h的殺傷效應；5.建立裸鼠移植瘤模型，以99mTc-RC-160為受體顯像劑，探索該受體介導的腫瘤顯像方法。
　　結(jié)果;獲得經(jīng)測序完全正確的hSSTR2基

3、因，RT-PCR及流式細胞術(shù)鑒定選取高表達hSSTR2基因的細胞株，體外結(jié)合實驗測得平衡解離常數(shù)KD=5.65×10-10mol/L，最大結(jié)合容量Bmax=2.01×104結(jié)合位點／細胞，半數(shù)抑制濃度IC50=1.88×10-9mol/L；131I－RC-160對A549-hSSTR2細胞的殺傷作用較其對A549-pcDNA3細胞殺傷作用明顯增強，并呈一定的劑量-效應和時間-效應關(guān)系，在96h時，3.7MBq/ml的131I－RC-16

4、0對A549-hSSTR2的抑制率達78.8±5.9％。裸鼠腫瘤模型顯像顯示靜脈注射顯像劑99mTc－RC-160后0.5－1h腫瘤顯影明顯，之后腫瘤顯影漸消退，于注射后24h腫瘤部位仍見顯影。
　　結(jié)論:將hSSTR2轉(zhuǎn)染至該受體表達陰性的腫瘤細胞并進行受體介導的腫瘤顯像是可行的，適宜顯像時間為注射99mTc-RC-160后0.5－1h；131I－RC-160對A549-hSSTR2細胞的殺傷作用較131I或RC-160對A54