131I-RC-160及5-FC對(duì)共表達(dá)CD-IRES-hSSTR2腫瘤細(xì)胞的協(xié)同殺傷作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立穩(wěn)定共表達(dá)人生長(zhǎng)抑素受體2亞型（SSTR2）和大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶（CD）的非小細(xì)胞型肺腺癌A549細(xì)胞系，并建立荷瘤裸鼠模型，通過(guò)99Tcm-RC-160進(jìn)行hSSTR2介導(dǎo)的報(bào)告基因放射性核素受體顯像，觀察其顯像特征；通過(guò)131I－RC-160聯(lián)合5-FC進(jìn)行荷瘤裸鼠腫瘤的實(shí)驗(yàn)性治療并觀察其治療效果。
　　方法:應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄PCR方法從人胚腎293細(xì)胞中克隆人SSTR2基因，通過(guò)基因重疊延伸拼接（SOE）結(jié)合PCR方法

2、將CD、內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)（IRES2）和SSTR2連接，并構(gòu)建表達(dá)載體。體外轉(zhuǎn)染人非小細(xì)胞型肺腺癌A549細(xì)胞并篩選，通過(guò)間接免疫熒光、RT-PCR、WesternBlot及流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)SSTR2的表達(dá)，建立穩(wěn)定表達(dá)的pCIS－A549細(xì)胞株，將其植入BALB/C雄性裸鼠建立荷瘤裸鼠模型；用酒石酸亞錫作還原劑，用99Tcm直接標(biāo)記RC-160，進(jìn)行hSSTR2介導(dǎo)荷瘤裸鼠的報(bào)告基因顯像，并設(shè)立接種未轉(zhuǎn)染CD-IRES-hSSTR

3、2A549腫瘤的裸鼠為對(duì)照組，于30min、1h、2h、4h、8h、12h、24h等不同時(shí)間點(diǎn)觀察其顯像特征。采用NBS法進(jìn)行131I標(biāo)記RC-160，觀察131I－RC-160加5-FC、131I－RC-160、5-FC、Na131I對(duì)移植瘤的抑制作用，等量的生理鹽水作藥物的空白對(duì)照，治療結(jié)束后，計(jì)算抑瘤率，隨后處死裸鼠取腫瘤組織作HE染色和免疫組化染色觀察移植瘤的病理組織學(xué)變化。
　　結(jié)果:1.成功克隆了人SSTR2基因，并構(gòu)

4、建了CD和SSTR2基因的雙順?lè)醋颖磉_(dá)載體，進(jìn)一步建立了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染上述表達(dá)載體的pCIS－A549細(xì)胞株，間接免疫熒光、RT-PCR、WesternBlot及流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)證實(shí)了SSTR2的表達(dá)；2.99Tcm-RC-160經(jīng)尾靜脈注射后，30min就可見(jiàn)腫瘤部位顯像，4-8h腫瘤顯影呈放射性高度濃集影，12h持續(xù)顯影，而對(duì)照組腫瘤始終未見(jiàn)顯影。3.治療結(jié)果統(tǒng)計(jì)中，把對(duì)pCIS－A549移植瘤治療的幾個(gè)組與生理鹽水組比較，131I－R

5、C-160加5-FC聯(lián)合治療組、5-FC治療組和131I－RC-160治療組的移植瘤生長(zhǎng)明顯受抑，其抑瘤率分別為（82.75±4.2）％、（70.69±2.9）％和（66.36±3.7）％；HE染色顯示：聯(lián)合治療組的腫瘤組織大部分片狀壞死，壞死區(qū)域達(dá)80％左右，131I治療組瘤體組織也可見(jiàn)部分點(diǎn)片狀壞死；免疫組化染色顯示聯(lián)合治療組呈現(xiàn)大片壞死區(qū)域，5-FC治療組和131I－RC-160治療組亦呈現(xiàn)小片狀壞死區(qū)域，131I治療組壞死區(qū)域較

6、小，而生理鹽水治療組則未見(jiàn)明顯壞死區(qū)域。在各組比較中可以看出，聯(lián)合治療組的抑瘤作用明顯強(qiáng)于其它各單種藥物治療組。Na131I組對(duì)轉(zhuǎn)染或未轉(zhuǎn)染的移植瘤的抑制效應(yīng)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論:本研究建立的人非小細(xì)胞型肺腺癌細(xì)胞系(pCIS-A549)可以共表達(dá)人SSTR2和大腸桿菌CD“自殺”基因，99Tcm-RC-160可用于荷pCIS-A549腫瘤裸鼠的報(bào)告基因顯像，131I-RC-160協(xié)同5-FC治療荷pCIS腫瘤的抑瘤效