胎盤血來(lái)源CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)培養(yǎng)及其對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷作用的研究.pdf

1、目的：探索以胎盤血為來(lái)源的細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（即CIK細(xì)胞）有效的原代培養(yǎng)方法，及其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，為該細(xì)胞在腫瘤過(guò)繼免疫的臨床治療提供一定的參考。
　　方法：在無(wú)菌條件下，采集健康足月產(chǎn)胎兒的胎盤臍靜脈血及健康成人的外周血，以Ficoll離心法分別提取單個(gè)核細(xì)胞，通過(guò)定時(shí)定量加入INF-γ、IL-2、IL-1、抗CD3單克隆抗體等細(xì)胞因子，使胎盤血來(lái)源單個(gè)核細(xì)胞及外周血單個(gè)核細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)成為CIK細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)

2、定細(xì)胞的免疫表型，利用CCK試劑在細(xì)胞增殖的最高峰時(shí)期檢測(cè)不同濃度的效應(yīng)細(xì)胞對(duì)人肺腺癌細(xì)胞株A549，宮頸癌細(xì)胞株Hela以及肝癌細(xì)胞株HepG2的殺傷作用，以及不同作用時(shí)間對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷率的變化。
　　結(jié)果：1.兩種單個(gè)核細(xì)胞通過(guò)一定量的細(xì)胞因子相互聯(lián)合作用，均可培養(yǎng)出活性高數(shù)量大的CIK細(xì)胞，胎盤血來(lái)源的CIK細(xì)胞在培養(yǎng)的第6天左右開始呈對(duì)數(shù)增殖，在第15天左右達(dá)高峰，增殖的倍數(shù)是第0天的（207.91±20.08）倍，與外周

3、血來(lái)源CIK細(xì)胞有一定的差異（P<0.05），15天之后兩組CIK細(xì)胞均進(jìn)入增殖的平臺(tái)期；2.收集增殖高峰期的兩種CIK細(xì)胞，檢測(cè)CD3+CD8+和CD3+CD56+的細(xì)胞較第0天均有明顯的增長(zhǎng)，胎盤血來(lái)源的CIK細(xì)胞組兩種表型的細(xì)胞分別增長(zhǎng)了3倍和1000倍，與外周血來(lái)源的CIK細(xì)胞組相比較，在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有差異；3.在效應(yīng)細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷性檢測(cè)中我們發(fā)現(xiàn)：針對(duì)A549、Hela及HepG2這三種腫瘤細(xì)胞，兩種來(lái)源的CIK細(xì)胞均表現(xiàn)

4、出了一定細(xì)胞毒性，并且CIK細(xì)胞的濃度越高其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷率就越高，在效靶比為40︰1組胎盤血來(lái)源的CIK細(xì)胞對(duì)A549的殺傷作用最強(qiáng)（76.59±2.38），與外周血來(lái)源的CIK細(xì)胞存在差異（p＜0.05），對(duì)Hela細(xì)胞和HepG2細(xì)胞的殺傷率分別為（75.54±6.92）和（72.49±3.16），但跟外周血來(lái)源組相比存在明顯差異（p＜0.01）；4.分別比較在相互作用為24，48，72小時(shí)的情況下檢測(cè)胎盤血來(lái)源CIK細(xì)胞的殺瘤

5、活性，我們發(fā)現(xiàn)在相互作用時(shí)間在48小時(shí)時(shí)，效應(yīng)細(xì)胞對(duì)A549，Hela，HepG2三組腫瘤細(xì)胞的殺傷率分別達(dá)到了（76.35±2.04），（75.96±4.56），（73.92±2.39），與24小時(shí)組存在差異（p＜0.05），但我們同時(shí)發(fā)現(xiàn)相比較作用48小時(shí)與72小時(shí)的殺傷率，二者的殺傷力相差甚微，p＞0.05，兩組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明CIK細(xì)胞在48小左右達(dá)到了最大殺傷作用。
　　結(jié)論：1.胎盤血可作為誘導(dǎo)CIK細(xì)胞的重要來(lái)