荷CEA-rV的DC誘導的CIK對CEA陽性原代腫瘤細胞的特異性殺傷作用.pdf

1、背景：腫瘤(tumor,neoplasm)是一類嚴重危害人類身體健康的常見病和多發(fā)病，全世界每年約有500萬人死于惡性腫瘤，我國惡性腫瘤發(fā)病率每年約在100/10萬人口以上，每年約90萬人死于惡性腫瘤。人們不斷的拓展對于惡性腫瘤的治療寬度與深度，生物治療是在傳統(tǒng)的腫瘤治療模式上發(fā)展起來的第四種治療模式，生物療法與其他療法的不同之處，就是在于它可以幫助機體恢復同腫瘤細胞作斗爭的能力，最大限度地調動人體的免疫功能，同時生物治療產生的大量特

2、 異而有效的免疫效應細胞可以對體內殘存腫瘤細胞具有更直接更有效的殺滅作用。樹突狀細胞(Dendriticcell，DC)是一種功能強大的抗原遞呈細胞，能夠吞噬、處理腫瘤抗原并把抗原信號傳遞給淋巴細胞，并且這種處理抗原的能力在體外要遠遠高于體內的其他提呈細胞，從而引起抗原特異性免疫反應，并在細胞免役調節(jié)反應中起重要作用。癌胚抗原(CarcinoembryonicAntigen，CEA)是首先在結腸癌病人的血清中發(fā)現(xiàn)的一種球蛋白，在原

3、發(fā)性結腸癌患者CEA增高占45-80％；食道癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系統(tǒng)的腫瘤陽性率也很高，一般在50-70％。CIK細胞(cytokineinducedkiller，CIK)溶瘤作用是非MHC限制性的，即不受癌癥組織類型的限制，因此對任何一種癌癥均有殺滅作用。我們選擇CEA陽性的惡性腫瘤進行原代細胞培養(yǎng)，采用CEA重組基因痘苗(CEArecombinantvirus，CEA-rV)負荷臍血來源DC后，再誘導抗原特異的CIK細胞，研

4、究其對CEA陽性惡性腫瘤原代細胞殺傷活性作用。 目的：用CEA-rV負荷臍血來源DC后，再誘導CEA抗原特異的CIK，研究負載了CEA-rV的DC和CIK共培養(yǎng)后對CEA陽性原代腫瘤細胞的殺傷活性的作用。 方法：選取臨床上血清學檢測CEA表達增高的腫瘤患者的手術標本，進行原代細胞培養(yǎng)。對CEA-rV進行擴增和滴度測定。用淋巴細胞分離液分離臍帶血單核細胞(cordbloodmononuclearcell，CBMC)，分別誘

5、導DC、CEA-rV負載DC和CIK細胞，并與CIK混合培養(yǎng)誘導CEA特異的細胞毒性T淋巴細胞(CEA-rV-DC-CIK組)、并且設計無CEA-rV負載的DC和CIK細胞混合組(DC-CIK組)、單純CIK組、CEA-rV-DC-單個核細胞組和單個核細胞組。用光學顯微鏡和電子顯微鏡觀察DC的形態(tài)和胞內結構和原代腫瘤細胞的結構，流式細胞儀檢測DC和CIK的分子表型；MTT法測殺傷活性。 結果：在負荷CEA抗原多肽的DC的共同培養(yǎng)

6、下，所誘導的CEA抗原特異性的CIK對CEA陽性原代腫瘤細胞具有抗原特異的殺傷活性。①CIK細胞較CBMC對原代腫瘤細胞的殺傷活性明顯提高(52.3％和48.5，P＜0.05)。②CEA-rV-DC-CIK對CEA陽性原代腫瘤細胞的殺傷活性明顯高于DC-CIK細胞(P＜0.001)。③CEA-rV-DC-CIK和CEA-rV-DC-CBMC比較，發(fā)現(xiàn)在相同抗原刺激下CIK細胞的殺傷活性明顯高于CBMC(P＜0.001)。④DC-CIK組