人殺傷細(xì)胞抑制性受體CD158 cDNA的克隆與表達(dá)及體外殺傷活性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:克隆并鑒定人的CD158基因,通過(guò)基因轉(zhuǎn)染的方法在淋巴細(xì)胞上獲得表達(dá),采用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的方法來(lái)初步研究其對(duì)細(xì)胞生物學(xué)活性的改變.結(jié)論:1.測(cè)序表明該實(shí)驗(yàn)已成功克隆了人的CD158全長(zhǎng)cDNA.改進(jìn)的快速鑒定RNA電泳的方法簡(jiǎn)單、有效.建立了一種釣取低豐度表達(dá)基因CD158的方法.2.流式細(xì)胞儀測(cè)定CD158b表達(dá)率的結(jié)果,一方面顯示逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體pMSCVneo轉(zhuǎn)染效率較高,可以用于目的基因的轉(zhuǎn)移.另一方面也表明CD158

2、b在淋巴細(xì)胞上獲得了高效表達(dá).3.MTT混合淋巴細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明轉(zhuǎn)染了受者CD158b基因的供者淋巴細(xì)胞對(duì)受者淋巴細(xì)胞的殺傷活性大大降低了,而空載體及未轉(zhuǎn)染組供者淋巴細(xì)胞對(duì)受者淋巴細(xì)胞的殺傷活性無(wú)明顯變化.說(shuō)明CD158b基因不僅獲得了表達(dá),而且使淋巴細(xì)胞的生物學(xué)活性發(fā)生了改變.或者說(shuō)CD158b與相應(yīng)配體結(jié)合后能夠下調(diào)殺傷細(xì)胞的殺傷活性,誘導(dǎo)了免疫耐受.4.對(duì)個(gè)體化的過(guò)繼免疫治療和防治GVHD有指導(dǎo)意義.在了解受者KIR(主要是C