選擇性阻斷CD158受體表位對NK細(xì)胞殺傷活性的影響.pdf

1、目的：
　　 研究用單克隆抗體封閉CD158受體表位的NK細(xì)胞,對于自身腫瘤細(xì)胞殺傷活性的變化,探討NK細(xì)胞受體與配體之間的相容性對NK細(xì)胞殺傷活性的調(diào)節(jié)作用和其機(jī)理。
　　 方法：
　　 應(yīng)用免疫磁珠陰性分選法分離急性髓系白血病患者及健康志愿者外周血NK細(xì)胞,體外培養(yǎng)擴(kuò)增,以NK細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,K562細(xì)胞為靶細(xì)胞,用CCK-8試劑盒分別檢測患者及健康人NK細(xì)胞在1:1、5:1、10:1效靶比下對K562細(xì)胞的

2、殺傷活性。取初治確診的急性髓系白血病患者新鮮骨髓液,經(jīng)Ficoll淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法分離白血病細(xì)胞,體外培養(yǎng)。用CD158a、CD158b單克隆抗體封閉患者NK細(xì)胞的CD158a、CD158b受體表位,以急性髓系白血病患者NK細(xì)胞為效應(yīng)細(xì)胞,分離的自身白血病細(xì)胞為靶細(xì)胞,CCK-8試劑盒分別檢測受體表位封閉前后NK細(xì)胞在1:1、5:1、10:1效靶比下對靶細(xì)胞的殺傷活性。
　　 結(jié)果：
　　 (1)患者NK細(xì)胞

3、與正常人NK細(xì)胞一樣對K562細(xì)胞有高度殺傷活性,且隨效靶比增大而增高,差異有顯著性(P＜0.05);患者及健康人在相同效靶比下對K562細(xì)胞的殺傷活性差異均無顯著性(0P＞0.05),表明急性髓系白血病患者NK細(xì)胞的細(xì)胞毒功能是完整成熟的。
　　 (2)急性髓系白血病患者NK細(xì)胞對自身白血病細(xì)胞殺傷作用很弱,效靶比1:1時(shí),殺傷活性僅有(1.54±0.3)％,5:1時(shí)(5.6±0.8)%,即使效靶比增至10:1殺傷活性也只有(

4、11.8±0.6)%。CDl58單克隆抗體封閉CD158抑制性受體表位后急性白血病患者NK細(xì)胞對自身白血病細(xì)胞殺傷作用明顯增強(qiáng),在1:1、5:1、10:1效靶比下分別為(21.8±0.7)%、(38.6±0.9)%、(53.9±1.4)%,各效靶比組與封閉前比較差異有顯著性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 封閉NK細(xì)胞的CDl58受體表位可提高NK細(xì)胞對自身腫瘤細(xì)胞的體外殺傷能力,NK細(xì)胞抑制性KIRs相容性改變可