抑制性受體TIGIT對(duì)NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫的影響.pdf

1、基于免疫檢查點(diǎn)的腫瘤免疫治療目前吸引了大量的關(guān)注，很多研究表明阻斷免疫檢查點(diǎn)可以增強(qiáng)T細(xì)胞的效應(yīng)功能，從而促進(jìn)適應(yīng)性免疫介導(dǎo)的抗腫瘤應(yīng)答，PD-1/PD-L1和CTLA-4的阻斷治療在臨床上也取得了驚人的療效。TIGIT作為一個(gè)新興的抑制性受體，會(huì)促進(jìn)T細(xì)胞的耗竭，抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答，從而促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。而在抗腫瘤免疫反應(yīng)中，除了T細(xì)胞特異性識(shí)別腫瘤抗原之外，NK細(xì)胞也能發(fā)揮重要的抗腫瘤作用;但是在腫瘤發(fā)展過(guò)程中，TIGIT

2、對(duì)NK細(xì)胞耗竭的影響，以及對(duì)NK細(xì)胞抗腫瘤免疫應(yīng)答的影響，這些均未有研究闡明。本研究則對(duì)腫瘤發(fā)展過(guò)程中TIGIT和NK細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤應(yīng)答之間的關(guān)系進(jìn)行了研究。
　　1.TIGIT高表達(dá)于腫瘤浸潤(rùn)NK細(xì)胞上并促進(jìn)NK細(xì)胞耗竭
　　我們收集了多例腫瘤病人（結(jié)腸癌和乳腺癌）的新鮮癌中心組織和癌旁組織標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)與癌旁NK細(xì)胞相比，癌中心的NK細(xì)胞顯著上調(diào)表達(dá)TIGIT，說(shuō)明腫瘤的發(fā)展促進(jìn)TIGIT在NK細(xì)胞上高表達(dá)。
　　為

3、了進(jìn)一步研究TIGIT與NK細(xì)胞之間的關(guān)系，我們構(gòu)建了六種小鼠腫瘤模型，檢測(cè)了腫瘤浸潤(rùn)NK細(xì)胞和CTL上TIGIT、PD-1、CTLA-4抑制性受體的表達(dá)。發(fā)現(xiàn)隨著腫瘤的發(fā)展，腫瘤浸潤(rùn)的NK細(xì)胞主要以TIGIT+PD-1-CTLA-4-的細(xì)胞群為主;而腫瘤浸潤(rùn)的TIGIT+CTL大多都是PD-1+或者CTLA-4+的;證明了在腫瘤發(fā)展過(guò)程中，TIGIT是一個(gè)與NK細(xì)胞更相關(guān)的調(diào)控分子，并且NK細(xì)胞更特異性的被TIGIT調(diào)控，而不是PD-

4、1或者CTLA-4。
　　通過(guò)對(duì)比分析腫瘤浸潤(rùn)TIGIT+NK和TIGIT-NK細(xì)胞的表型、效應(yīng)功能和凋亡能力，我們發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤(rùn)TIGIT+NK細(xì)胞處于更加耗竭狀態(tài)。而腫瘤浸潤(rùn)NK細(xì)胞大多是TIGIT+的，以上結(jié)果證明腫瘤發(fā)展促進(jìn)TIGIT高表達(dá)于腫瘤浸潤(rùn)NK細(xì)胞并促進(jìn)其細(xì)胞耗竭。
　　2.TIGIT缺失可逆轉(zhuǎn)NK細(xì)胞耗竭并且促進(jìn)腫瘤的清除
　　我們?cè)赥igitfl/fl-Ncr1iCre/+小鼠（NK細(xì)胞特異性缺失T

5、IGIT）中進(jìn)行荷瘤實(shí)驗(yàn)，和對(duì)照鼠相比，發(fā)現(xiàn)TIGIT在NK細(xì)胞上缺失后，腫瘤增長(zhǎng)顯著減緩，小鼠生存周期顯著延長(zhǎng)，并且腫瘤浸潤(rùn)NK細(xì)胞和CTL的功能得到恢復(fù)。證明TIGIT高表達(dá)于NK細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞耗竭從而加速腫瘤發(fā)展。
　　3.TIGIT單獨(dú)阻斷可逆轉(zhuǎn)NK細(xì)胞耗竭并且促進(jìn)腫瘤的清除
　　我們構(gòu)建了一株特異性識(shí)別TIGIT的阻斷性單克隆抗體，利用這株抗體我們進(jìn)行小鼠體內(nèi)腫瘤治療實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)TIGIT阻斷后，能夠顯著抑制結(jié)腸癌、黑

6、色素瘤、乳腺癌和纖維肉瘤的增長(zhǎng)，并且能夠逆轉(zhuǎn)腫瘤浸潤(rùn)NK細(xì)胞和CTL的耗竭。
　　4.TIGIT介導(dǎo)的NK細(xì)胞耗竭不依賴于適應(yīng)性免疫系統(tǒng)
　　在適應(yīng)性免疫缺陷鼠中(Rag2-/-，NOD-SCID和SCID)，我們構(gòu)建了結(jié)腸癌模型，發(fā)現(xiàn)腫瘤浸潤(rùn)的NK細(xì)胞仍顯著高表達(dá)TIGIT，并且腫瘤浸潤(rùn)的TIGIT+NK細(xì)胞仍處于功能更加耗竭狀態(tài)。
　　5.TIGIT阻斷介導(dǎo)的NK細(xì)胞功能逆轉(zhuǎn)不依賴于適應(yīng)性免疫系統(tǒng)
　　在適應(yīng)

7、性免疫缺陷鼠中(Rag2-/-，NOD-SCID和SCID)構(gòu)建結(jié)腸癌模型，利用TIGIT阻斷抗體進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)TIGIT阻斷仍能逆轉(zhuǎn)NK細(xì)胞功能，并且抑制腫瘤的增長(zhǎng)。
　　6.TIGIT/PD-L1阻斷介導(dǎo)的增強(qiáng)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答依賴于NK細(xì)胞
　　我們首先構(gòu)建了小鼠黑色素瘤模型，并清除NK細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移顯著增加，CTL耗竭加重。在NK細(xì)胞缺失的條件下，即使再加入TIGIT阻斷治療，腫瘤增長(zhǎng)不能得到抑制，并且CTL功能也

8、不能被逆轉(zhuǎn)。
　　隨后我們又在小鼠結(jié)腸癌模型中進(jìn)行了驗(yàn)證，清除NK細(xì)胞后，分別給予TIGIT單獨(dú)阻斷、PD-L1單獨(dú)阻斷和TIGIT與PD-L1聯(lián)合阻斷治療，發(fā)現(xiàn)沒有NK細(xì)胞三種阻斷治療方案的治療效果均消失，腫瘤不受控制的增長(zhǎng)，并且CTL耗竭加重。
　　7.TIGIT單獨(dú)阻斷能夠激發(fā)潛在的抗腫瘤記憶應(yīng)答
　　我們利用TIGIT單獨(dú)阻斷治愈的小鼠（結(jié)腸癌和黑色素瘤），給予小鼠二次腫瘤攻擊，不再給予任何治療處理，和對(duì)照組相