stat基因在cdt細(xì)胞介導(dǎo)抗腫瘤免疫中的重要作用

1、背景,STAT家族是介導(dǎo)細(xì)胞因子、生長因子信號通路上啟動(dòng)蛋白轉(zhuǎn)錄的重要轉(zhuǎn)錄因子，它們在許多信號通路的細(xì)胞分子事件中都起到重要作用，例如細(xì)胞分化、細(xì)胞增殖和存活。 其中STAT3基因除了在正常生理狀態(tài)下發(fā)揮重要作用，其在腫瘤發(fā)生過程中參與了誘導(dǎo)細(xì)胞化生，而與腫瘤發(fā)病密切相關(guān)。 已有多組報(bào)導(dǎo)顯示，抑制STAT3的表達(dá)能夠殺傷荷瘤小鼠體內(nèi)的腫瘤，證明其抑制劑的使用能夠增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤作用。,,在本研究中，我們使用 LoxP-Cre 系統(tǒng)建立

2、了在CD4+ T細(xì)胞中特異性敲除STAT3基因的小鼠。此小鼠基本生理狀況與野生型沒有明顯差別，但在體外培養(yǎng)的CD4+ T細(xì)胞相對于野生型，卻在TCR激活后表現(xiàn)出增殖減弱、凋亡增加。異體瘤接種實(shí)驗(yàn)表明，接種B16黑色素瘤于CD4-STAT3 缺陷型小鼠后，其生長速率高于野生型。T細(xì)胞過繼治療模型顯示，此種 STAT3 缺陷的CD4+ T細(xì)胞無法擴(kuò)增CD8+ T細(xì)胞，而導(dǎo)致無法清除B16黑色素瘤。進(jìn)一步研究顯示，STAT3 缺陷的C

3、D4+ T細(xì)胞在TCR激活后，相對于野生型的CD4+ T細(xì)胞，表達(dá)Bcl-2更低，Bak 更高。 這一結(jié)果提示STAT3基因?qū)τ赥CR激活后的T細(xì)胞存活十分重要，其能保護(hù)T細(xì)胞免于凋亡，而得到健全的T細(xì)胞介導(dǎo)抗腫瘤免疫能力。,方法,鑒定 STAT3-/- CD4+ T 細(xì)胞表型CD4+ T細(xì)胞分化能力及細(xì)胞因子釋放分析CD4+ T細(xì)胞增殖能力分析和凋亡分析B16異體瘤移植實(shí)驗(yàn)及T細(xì)胞過繼免疫實(shí)驗(yàn)STAT3及相關(guān)信號通路分

4、析,,,,,,1. CD4+ T 細(xì)胞STAT3 敲除小鼠的構(gòu)建,結(jié)果,Fig1. Loxp-Cre體系的建立及western blot 分析CD4+ T 細(xì)胞中STAT3敲除,2. STAT3-/- CD4+ T 細(xì)胞表型 Fig2. STAT3-/-小鼠的CD4+和CD8+ T細(xì)胞與野生型 STAT3f/f小鼠沒有明顯差別。,,,3. STAT3-/-敲除小鼠及STAT3f/f野生型小鼠的CD4+ T 細(xì)胞亞群及誘導(dǎo)分化能力分

5、析 Fig3A. nTreg及誘導(dǎo)Th17流式細(xì)胞術(shù)分析，以及Treg抑制功能分析。,,Fig3B. ELISA結(jié)果顯示STAT3-/-和 STAT3f/f 小鼠的CD4+ T 細(xì)胞在TCR激活后細(xì)胞因子釋放能力差異,,,Fig5. B16異體瘤移植實(shí)驗(yàn)及T細(xì)胞過繼免疫實(shí)驗(yàn)，檢測STAT3-/-的CD4+ T 細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫能力,,Fig6A. STAT3基因在TCR信號通路中的作用,,,Fig6B. STAT3基因在凋亡通

6、路和MAPK通路中的作用,討論,我們發(fā)現(xiàn)STAT3-/-小鼠的CD4+ T 細(xì)胞增殖能力下降、細(xì)胞因子釋放能力下降。我們進(jìn)一步證實(shí)這種增殖能力和細(xì)胞因子釋放的下降其實(shí)質(zhì)是其凋亡的增多。通過移植瘤實(shí)驗(yàn)和T細(xì)胞過繼免疫實(shí)驗(yàn)證實(shí)，STAT3 敲除的CD4+ T 細(xì)胞其抗腫瘤免疫能力下降。STAT3-/-小鼠的CD4+ T 細(xì)胞表現(xiàn)出的這些表型與其TCR激活后TCR下游Bcl-2凋亡信號通路、MAPK通路的調(diào)控相關(guān)。以上這些發(fā)現(xiàn)證實(shí)，S