Fractalkine-CX3CR1在腫瘤細(xì)胞的表達及其在NK細(xì)胞依賴的免疫監(jiān)視機制中的重要作用.pdf

1、腫瘤免疫是免疫學(xué)研究的重要方向。雖然圍繞腫瘤細(xì)胞發(fā)生、發(fā)展已經(jīng)提出了不少的機制，對于腫瘤細(xì)胞如何逃避免疫細(xì)胞，特別是T細(xì)胞、NK細(xì)胞的監(jiān)視，也有不少的實驗解釋。但是到目前為止腫瘤免疫學(xué)的研究對于腫瘤的臨床治療仍然不能完全的理論指導(dǎo)，還需要更廣泛的研究去揭示腫瘤發(fā)生的秘密，為腫瘤的消除提供足夠的支持。 趨化因子是一群分子量不大的可溶性蛋白，是免疫系統(tǒng)的重要組成部分，在免疫細(xì)胞的遷移和歸巢方面起關(guān)鍵作用。同其他免疫系統(tǒng)成員一樣，腫瘤

2、細(xì)胞對趨化因子的利用也是其逃避免疫系統(tǒng)監(jiān)視，完成腫瘤擴散的一個有效的手段。Fractalkine是一種較晚發(fā)現(xiàn)的趨化因子，其獨特的分子結(jié)構(gòu)，雙重的存在形式，使其成為趨化因子研究的一個重要分子。但是其在腫瘤細(xì)胞中的表達情況的研究還不是很充分，其是否是腫瘤逃避免疫監(jiān)視的一個機制成為令人關(guān)心的課題。 我們的工作首先檢測了多種腫瘤細(xì)胞系中趨化因子fractalkine和它的受體CX3CR1的表達情況。該部分的結(jié)果顯示了該趨化因子在腫瘤細(xì)

3、胞系中的廣泛表達，表明該趨化因子在腫瘤發(fā)生重的重要作用。該部分的結(jié)果還顯示不僅該趨化因子的表達十分廣泛，它的受體的表達也比較的多。原始組織不表達該受體的，發(fā)生腫瘤后有可能獲得該受體的表達；來源細(xì)胞表達CX3CR1的，腫瘤發(fā)生后更有可能保留該特性。這一發(fā)現(xiàn)可能暗示，CX3CR1/fractalkine在腫瘤的轉(zhuǎn)移中可能扮演不能忽視的角色。在功能方面，我們發(fā)現(xiàn)了腫瘤的對NK細(xì)胞的敏感性可能和NK細(xì)胞表面表達的CX3CR1和腫瘤表面表達的fr

4、actalkine有關(guān)系，因為fractalkine既可以作為趨化因子招募活化NK細(xì)胞，又同時擁有黏附分子的功能。 為了充分的了解CX3CR1/fractaIkine系統(tǒng)對于NK細(xì)胞殺傷腫瘤中的貢獻，我們具體研究了這一對分子在K562細(xì)胞對NK細(xì)胞的殺傷敏感性方面的作用。我們的工作部分解釋了K562細(xì)胞對NK細(xì)胞敏感的原因。為此我們設(shè)計了多個實驗。首先，我們證實了K562不僅表達fractaIkine，同時也表達ADAM10。這

5、提示了我們K562不僅表達fractalkine，并且在它的條件培養(yǎng)基中還含有可以活化NK細(xì)胞的可溶性蛋白。接下來的殺傷實驗證實了我們的推測。加入適當(dāng)比例的條件培養(yǎng)基，培養(yǎng)體系中的NK細(xì)胞可以被活化，而更好的殺傷腫瘤細(xì)胞。我們還是發(fā)現(xiàn)可溶性的fractalkine對NK-92細(xì)胞也有相同的效果。以可溶性fractalkine預(yù)刺激過的NK-92的殺傷能力明顯的增強。而用抗體阻斷fractaIkine/CX3CR1的相互作用則可以明顯的保

6、護K562細(xì)胞免受NK-92細(xì)胞的殺傷，降低K562細(xì)胞對NK細(xì)胞毒活性的敏感性。這些工作就部分的闡述了K562細(xì)胞表達的fractalkine所具有的生理學(xué)意義要充分了解CX3CR1/fractalkine系統(tǒng)對于NK細(xì)胞殺傷腫瘤中的貢獻，處理在天然表達這一分子的腫瘤細(xì)胞上做研究之外，還需要仔細(xì)比較只有fractalkine表達有差異的兩個細(xì)胞系不同。為此我們構(gòu)建了兩個不同的HeLa細(xì)胞系。它們都導(dǎo)入了pcDNA3載體，它們的唯一差異

7、在于FKN-HeLa在細(xì)胞表面重組表達fractaIkine蛋白，而mock-HeLa只導(dǎo)入了pcDNA3的空載體。在這兩個細(xì)胞系的基礎(chǔ)上，通過體外的細(xì)胞刺激和細(xì)胞殺傷實驗，我們比較全面地證實了膜表面的fractalkine對NK細(xì)胞的活化功能，包括細(xì)胞因子的分泌和細(xì)胞毒活性。這些結(jié)果證明了腫瘤細(xì)胞可以通過趨化因子的產(chǎn)生而直接的作用于NK細(xì)胞，并可以通過NK細(xì)胞的這兩種能力影響整個免疫系統(tǒng)。 我們的這些工作第一次比較全面的了解了

8、fractalkine/CX3CR1在腫瘤中的分布情況，并且具體研究了這一對分子在NK細(xì)胞殺傷某些腫瘤細(xì)胞中的作用。在這基礎(chǔ)上，通過構(gòu)建的兩個細(xì)胞系，我們證實了腫瘤細(xì)胞表面的fractaIkine可以直接的和NK細(xì)胞相互作用，對免疫系統(tǒng)做出深刻的影響。這些結(jié)果為揭示腫瘤逃逸中趨化因子扮演的角色，確定NK細(xì)胞在腫瘤免疫中的作用給出了很好的線索。當(dāng)然，為了揭示這些秘密還需要進行進一步的體內(nèi)實驗以深化現(xiàn)階段的工作，這將成為未來工作的一個重要的