供者異源反應性NK細胞對受者白血病細胞殺傷活性研究.pdf

1、殺傷細胞免疫球蛋白樣受體(KIR)是主要表達于人類NK細胞和部分活化T細胞表面的一類受體，特異性識別并結合靶細胞表面的HLA—I類分子，傳導抑制或激活信號。KIR基因位于人類染色體19q13．4的白細胞受體復合體(LRC)內(nèi)。KIR按結構分為2個和3個(KIR2D和KIR3D)免疫球蛋白樣胞外區(qū)，根據(jù)胞漿區(qū)結構域的不同分為有免疫受體酪氨酸活化基序(ITAM)的活化性受體(KIR2DS和KIR3DS)和有免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)

2、的抑制性受體(KIR2DL和KIR3DL)。KIR特異性識別不同的HLA分子，KIR2DLl／KIR2DSl結合HLA-C第2組(Cw2、Cw4、Cw5、Cw6、Cwl7、Cwl8)，特點是在MHCQl螺旋上77(Asn)和80(Lys)。KIR2DL2和KIR2DL3識別HLA-C第1組(Cwl、Cw3、Cw7、Cw8、Cwl3、Cwl4)特點是77(Ser)和80(Asn)；KIR3DLl識別HLA_BBw4；KIR3DL2識別HL

3、A-A3、HLA-A1l；KIR2DL4識別HLA-G。 KIR基因在不同個體間表達具有豐富的多樣性。在NK細胞的發(fā)育過程中KIR基因的表達是隨機選擇的，不同的HLA分子選擇具有可以識別自身抗原KIR受體的NK細胞。結果當KIR不能識別來自不同個體的HLA—I類分子時就會產(chǎn)生異源反應性，反之當KIR能夠識別來自不同個體的HLA—I類分子時就會產(chǎn)生免疫耐受。 眾多臨床移植資料和動物實驗證據(jù)提示，同種異源反應性NK細胞對于異

4、基因造血干細胞移植預后具有諸多有利影響：促進移植物植入，調節(jié)抗原遞呈細胞(APC)從而降低移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生率，識別和攻擊宿主白血病細胞發(fā)揮移植物抗白血病(GVL)效應降低移植后白血病的復發(fā)率。目前基于臨床規(guī)模的NK純化收集研究成功使得NK細胞輸注已開始應用于異基因造血干細胞移植的治療，初步結果顯示NK細胞治療是安全的。UharekL等已經(jīng)報道成功收集和純化NK細胞達到107&g以上的臨床應用數(shù)量以滿足臨床輸注的目的。對于

5、由于某些原因無法進行異基因造血干細胞移植的惡性血液病患者和自體造血干細胞移植患者進行自體或異源反應性NK細胞輸注的免疫治療已取得初步成果。 異源反應性NK細胞對于異基因造血干細胞移植的GVL作用主要是供者造血干細胞植入后分化而來的NK細胞產(chǎn)生的。但在促進植入以及惡性血液病免疫治療中，目前是直接輸注體外純化的NK細胞，這種未經(jīng)擴增的成熟細胞對白血病靶細胞殺傷活性能夠達到有效臨床治療目的嗎?眾多NK細胞殺傷活性的實驗都是體外增殖后的

6、NK細胞對敏感的細胞系如K562等作為靶細胞的殺傷，體外純化的NK細胞對白血病患者體內(nèi)的惡性細胞殺傷活性如何呢? 本研究旨在研究供者異源反應性NK細胞對受者白血病細胞的體外殺傷作用。首先采用PCR-SSP方法對收治的進行HLA高分辨配型的初治急性髓性白血病患者的供者進行5種抑制型KIR基因的檢測及其與受者HLA基因相合情況進行分析，篩選出5例受者及其10例供者，分為KIR相合組和KIR不合組兩組實驗組。制備凍存初治急性髓性白血病

7、患者新鮮的骨髓白血病細胞。利用免疫磁珠分離法陰性分離、純化供者外周血NK細胞。最后利用3H-TDR方法比較兩組供者體外純化的外周血NK細胞對受者白血病細胞的殺傷活性差異。 結果發(fā)現(xiàn)免疫磁珠分離法可以得到較高純度的CD3-CD(16+56)+NK細胞，由從分離前2．32-15．36％提高到分離后88．23-94．2％，細胞存活率平均值>90％，細胞回收率平均值>65％。3H-TDR方法比較KIR相合組和不相合組對受者白血病細胞的殺

8、傷差異結果發(fā)現(xiàn)：KIR不相合組四個不同效靶比情況下對受者白血病細胞殺傷活性均明顯高于KIR相合組。KIR不相合組不同效靶比之間兩兩比較結果提示：與5：1組比較其它3組效靶比情況下對白血病細胞殺傷具有明顯差異，與10：1組比較25：1和50：1均有明顯差異，25：1與50：1兩組比較差異無統(tǒng)計學意義。在KIR相合組無論任何一個效靶比都未見NK細胞對靶細胞明顯的殺傷，即使效靶比達到50：1也未發(fā)現(xiàn)明顯的殺傷效應，同時在效靶比10：l和25：