anti-CD20-scFv-IgGFc -CD28-ζ及anti-CD20-scFv -IgG Fc轉(zhuǎn)染人T淋巴細(xì)胞對(duì)Daudi細(xì)胞殺傷作用的比較.pdf

1、濕州嚼訾院碩士研究生畢業(yè)(學(xué)位)論文論文題目：anti—CD20一scFv—IgGFc—CD28一e及anti—CD20scFvIgGFc轉(zhuǎn)染人T淋巴細(xì)胞對(duì)Daudi細(xì)胞殺傷作用的比較綜述題目：Rituximab在血液疾病中的治療進(jìn)展研究生姓名：譚映霞學(xué)科專業(yè)：臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)學(xué)制：在職申請(qǐng)入學(xué)時(shí)間：2001年9月指導(dǎo)教師：俞康教授單大銘教授吳建波副教授二OO五年五月詁占州醫(yī)學(xué)院砸：學(xué)位恐殳一IgGFcCD28一∈和anti—CD20sc

2、Fv—IgGFc重組子的克隆滴度分別為5X103(CFU／m1)，TX103(CFU／m])。兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞表面的IgO表達(dá)量分別2278％D2536％3分離后的外周血單個(gè)核細(xì)胞，經(jīng)OKT3、IL一2、PEA—L刺激后的T淋巴細(xì)胞比例為951％，病毒上清感染后，經(jīng)G418篩選一周后，H口為我們實(shí)驗(yàn)所得的基因修飾的特異的T淋巴細(xì)胞。其中基因修飾的T細(xì)胞IgG的表達(dá)量均大于20％。4用基因修飾的特異的T淋巴細(xì)胞與相同數(shù)量的D

3、audi細(xì)胞培養(yǎng)厲，用流式細(xì)胞儀榆測(cè)Daudi細(xì)胞AnnexinV的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在24小時(shí)內(nèi)有與對(duì)照K562細(xì)胞明顯增高，PO05，而兩種質(zhì)粒介導(dǎo)的T細(xì)胞引起Daudi細(xì)胞AnnexinV的表達(dá)沒有顯著差異。i用ELISA檢測(cè)24、48、72小時(shí)時(shí)IL2、IFNv的含量，af]ti—CD20一scFv—IgOFc基因修飾的T細(xì)胞與Daudi細(xì)胞共同培養(yǎng)后，與對(duì)照紐相比，IL一2、IFNY無明顯增加，P005。6與anti—CD20scFv

4、—IgGFc基因修飾的T細(xì)胞相比較，anti—CD20一scFvIgGFcCD28一‘基因修飾的T細(xì)胞殺傷Daudi細(xì)胞后，IL一2和IFNv的表達(dá)有顯著增高，PO。05。結(jié)論：1經(jīng)OKT3、n2、PHA—1刺激后的PBMc能充分激活，能選擇性的T細(xì)胞生長(zhǎng)。逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染激活T淋巴細(xì)胞具有很高轉(zhuǎn)染效率，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)基因修飾的T細(xì)胞表達(dá)重組蛋白可達(dá)20％以上。這與轉(zhuǎn)染的PA317細(xì)胞能產(chǎn)出高滴度的病毒有關(guān)。2含anti—CD20一

5、scFvIggFc—CD28‘和anti—CD20一scFv—IgOFc重組子基因修飾的T細(xì)胞在引起Daudi細(xì)胞早期凋亡無顯著性差異，說明CD28一∈基因修飾可能不影響Daudi細(xì)胞的早期凋亡。_兩種基因修飾的T細(xì)胞在殺傷Daudi細(xì)胞的過程中，能產(chǎn)生【L一2、[FNY。anti—CD20一scFv—IggFc—CD28一‘基因修飾的T細(xì)胞殺傷Baudi細(xì)胞后，II。一2、IFNY增幅更加明顯，說明CD3‘可以刺激T細(xì)胞產(chǎn)生大量的細(xì)胞