Anti-CD28 scFv-CH3-KCCYSL的分子克隆、表達及活性鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究旨在對抗CD28的單鏈抗體進行人源化改造，并連入具有腫瘤靶向作用的寡肽KCCYSL，以期獲得具有刺激T細胞增殖和靶向腫瘤雙重作用的融合蛋白。
　　在先前的研究中，我們運用核糖體展示技術(shù)篩選出了一株抗CD28的單鏈抗體(anti-CD28 scFv)。但它缺少Fc片段，在體內(nèi)的半衰期短，很容易從血液中清除，而且在鑒定方面也存在困難。為彌補這一不足，我們首先提取出人外周血單個核細胞的總RNA，然后運用RT-PCR擴增出IgG1

2、CH3基因，再運用SOE PCR連接到anti-CD28 scFv基因上，得到s-C基因。
　　為了獲得靶向腫瘤的功能，我們運用SOE PCR將靶向Her2的KCCYSL基因與上述s-C基因相連得到s-C-K基因。最后將s-C-K基因插入到pET43.1a載體里，轉(zhuǎn)入E.coliBL21(DE3)中誘導(dǎo)表達。然后運用金屬螯合親和層析(Ni-NTA)純化。為準確地檢測融合蛋白兩部分的功能，我們研制出s-C和C-K蛋白作為陰性對照。間

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